Анотація до роботи:

Медвідь О.О. Розробка засобів специфічної профілактики бруцелаовісної та хламідійної інфекцій. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наук за спеціальністю 16.00.03 – ветеринарна мікробіологія та вірусологія, Національний науковий центр «Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини», Харків, 2006

У дисертації викладено результати вивчення імуногенності інактивованих емульсин-вакцин проти інфекційного епідидиміту баранів і хламідійної інфекції, а також після комбінованого їх застосування. Розроблено і випробувано експериментальні зразки інактивованої біемульсин-вакцини проти хламідійної та бруцелаовісної інфекцій.

Клініко-епізоотологічні, серологічні і бактеріологічні дослідження свідчать, що низький рівень відтворення у обстежених вівцегосподарствах був зумовлений хламідійною або поєднаним перебігом хламідійної і бруцелаовісної інфекцій.

Виготовлено і досліджено 5 серій інактивованої емульсин-вакцини проти ІЕ баранів з штаму B.ovis 67/Б і 5 серій інактивованої біемульсин-вакцини проти хламідійної та бруцелаовісної інфекцій. В порівняльних дослідженнях з зарубіжними вакцинами встановлено, що обидві вакцини індукують напружений імунітет проти експериментального зараження вірулентною культурою B. ovis в дозі 2 Ч 10⁹м.к./см³ підшкірно морських свинок і баранів в дозі 10 Ч 10⁹м.к./см³ на слизову кон’юнктиви та припуцію.

Комбіноване щеплення інактивованими протихламідійними та протибруцелаовісними вакцинами формувало імунітет до обох збудників: протективний показник титру хламідійних антитіл 1:16 виявили у 84 % щеплених морських свинок, поствакцинальні бруцелаовісні антитіла виявлено у 96 % тварин. Імунітет до експериментального зараження вірулентною культурою B. оvis встановлено у 100 % щеплених морських свинок.

Експериментальні зразки інактивованої біемульсин-вакцини проти хламідійної та бруцелаовісної інфекцій ННЦ «ІЕКВМ» на основі комерційних протихламідійних вакцин і інактивованого бактерину штаму B. ovis 67/Б були стерильними, нешкодочинними, слабореактогенними та імуногенними. На 30 добу протективний титр хламідійних антитіл 1:16 виявили у 66,7 - 100 %, показник титру бруцелаовісних антитіл в РТЗК становив 2,83 ± 0,5 log₂ - 5,0 ± 1,12 log₂. З бруцельозним антигеном в РБП антитіл не виявлено. Біемульсин-вакцина захищала щеплених морських свинок проти генералізованої інфекції після експериментального зараження культурою B. ovis в дозі 2 Ч 10⁹м.к./см³ підшкірно, у 3-х з 25 морських свинок було ізольовано культуру B. оvis з місця інокуляції культуру збудника, індекс інфікованості 2,91 %. В контрольних групах після зараження позитивно реагували 100 % тварин в РТЗК, заражаючу культуру реізольовано від 83,9 % тварин, індекс інфікованості 20,7 %.

Щеплення 20 овець інактивованою біемульсин-вакциною серія 2 та 3 в дозі 1,0 см³ підшкірно, стимулювало високі тири хламідійних і бруцелаовісних антитіл та захищало 100 % тварин від експериментального зараження культурою B. ovis в дозі 10 Ч 10⁹м.к./см³ на слизову препуцію та кон’юнктиви. В контрольних групах за даними серологічного дослідження заразилися всі тварини, заражаючу культуру виділено у 50 % позитивно реагуючих тварин. Ревакцинація овець через 9,5 місяців після щеплення інактивованою біемульсин-вакциною серія 2 в дозі 1,0 см³ підшкірно стимулювала появу бруцелаовісних антитіл в РТЗК і РІД і хламідійних антитіл в РЗК. Вакцина захищала від експериментального зараження культурою B. ovis всіх щеплених тварин. Інактивовану біемульсин-вакцину проти хламідійної та бруцелаовісної інфекцій пропонується для оздоровлення вівцеферм неблагополучних на змішану інфекцію.

Набір для ПЛР в медицині «Полімік» виробництва фірми НВФ «Літех» виявився придатним для індикації ДНК хламідій (Chlamydophila abortus) в жовткових культурах ізолятів від овець, а також для контролю вакцин на ДНК хламідій.

1. У дисертації на підставі вивчення літературних джерел, епізоотологічного аналізу, клініко-епізоотологічних обстежень вівцегосподарств, серологічних і бактеріологічних досліджень, а також результатів біологічного експерименту на лабораторних тваринах та вівцях, теоретично і експериментально обґрунтовано комбіноване щеплення інактивованих вакцин проти бруцелаовісної і хламідійної інфекцій, розроблено і випробувано з позитивним результатом експериментальні зразки біемульсин-вакцини проти зазначених інфекцій, а також виготовлено і досліджено інактивовану емульсин-вакцину проти інфекційного епідидиміту баранів.

2. Клініко-епізоотологічні обстеження і серологічні дослідження, проведені у п’яти племінних вівцефермах свідчать, що низький рівень відтворення приплоду (35 – 66%) зумовлений ураженістю вівцепоголів’я хламідійною або одночасного хламідійною і бруцелаовісною інфекціями. Хламідійну серопозитивність серед дослідженого дорослого поголів’я виявлено у 18,8 – 30,5 % і у молодняку віком до одного року у 9,09 - 47,62 %. З абортплоду та лімфовузлів вівцематки ізольовано на курячих ембріонах дві культури хламідій, які типовано як Chlamydophila abortus. Бруцелаовісну серопозитивність виявлено у 3,8 – 5,5 % досліджених тварин. З передміхурової залози барана ізольовано культуру Brucella ovis.

3. Вакцинний штам Brucella ovis 67/Б у виготовлених нами за лабораторним регламентом 5-ти експериментальних серій інактивованої емульсин-вакцини проти інфекційного епідидиміту баранів (бруцелаовісної інфекції) в дослідах на морських свинках і на вівцях показав високу антигенну активність і імуногенність і не індукував бруцельозну серопозитивность у щеплених тварин.

4. В порівняльних дослідженнях інактивованих емульсин-вакцин проти інфекційного епідидиміту баранів з штаму 67/Б і зарубіжної вакцини «ЕВАК» встановлено, що обидві вакцини забезпечували напружений протективний імунітет проти експериментального зараження вірулентною культурою Br. ovis в дозі 2 Ч 10⁹ м.к./см³ підшкірно. В контрольній групі заразилися всі морські свинки з індексом інфікованості 23,7 %. Вакцина з штаму 67/Б була менш реактогенною, ніж вакцина «ЕВАК».

5. В порівняльних дослідах двох ембріональних і однієї культуральної інактивованих вакцин проти хламідійної інфекції встановлено, що ембріональні вакцини виробництва Сумської біофабрики та фірми «Sanofi», введені підшкірно в дозі 0,5 см³, були помірно реактогенні, на 30 добу після щеплення протективний титр хламідійних антитіл в РЗК 1:16 встановлено у 100 % тварин, середній титр по групах становив 5,8 ± 0,97 log₂ та 5,22 ± 0,64 log₂ відповідно. Культуральна інактивована вакцина проти хламідіозу ВРХ та ДРХ (ООО «БЛИЦ»), щеплена в дозі 0,5 см³ внутрішньошкірно, мала помірну реактогенність, на 30 добу протективний титр хламідійних антитіл в РЗК 1:16 встановлено у 100 % тварин, середній титр по групі становив 5,8 ± 1,24 log₂.

6. Комбіноване підшкірне щеплення морським свинкам в дозі 0,5 см³ вітчизняної комерційної інактивованої протихламідійної емульсин-вакцини та двох серій експериментальної інактивованої емульсин-вакцини з штаму Br. ovis 67/Б (серії 6 та 6.1) на 30-у добу формувало гуморальний імунітет до обох вакцин: протективний показник титру хламідійних антитіл 1:16 виявлено у 67 % з середнім показником по групам 3,66 ± 0,23 log₂ та 2,0 ± 0,48 log₂ відповідно; поствакцинальні бруцелаовісні антитіла в РТЗК виявили у 91,7 % тварин в титрі 2,5 ± 0,67 log₂ та 2,16 ± 0,6 log₂, відповідно. Комбіноване щеплення захищало 100 % тварин від підшкірного зараження вірулентною культурою Brucella ovis 65939 в дозі 2 Ч 10⁹ м.к./см³. У контрольних групах морських свинок після зараження реагували всі тварини в РТЗК з бруцелаовісним антигеном з середнім показником титру антитіл 3,33 ± 0,59 log₂ культура реізольована у 83,3 % тварин, індекс інфікованості 27,8 %.

7. В дослідах на морських свинках після комбінованого щеплення: інактивованою емульсин-вакциною проти ІЕ баранів «ЕВАК» підшкірно 0,5 см³ та інактивованою культуральною емульсин-вакциною проти хламідіозу (ВІЕВ) в дозі 0,2 см³ внутрішньошкірно, спостерігали виражену реактогенність. На 30 добу середній титр хламідійних антитіл в РЗК становив 5,0 ± 0,89 log₂ з показником протективного титру антитіл 1:16 у 100 % тварин, титр бруцелаовісних антитіл в РТЗК становив 4,83 ± 0,38 log₂. Комбіноване щеплення захищало 100 % тварин від підшкірного зараження вірулентною культурою Brucella ovis 65939 в дозі 2 Ч 10⁹ м.к./см³. У всіх морських свинок контрольної групи після зараження реізольовано культуру Br. ovis, індекс інфікованості 45,83%.

8. Виготовлені нами експериментальні серії інактивованої біемульсин-вакцини проти хламідійної та бруцелаовісної інфекцій на основі комерційних інактивованих протихламідійних емульсин-вакцин виробництва Сумської біофабрики або фірми Sanofi та інактивованого бактерину штаму Br. ovis 67/Б були стерильними, нешкодочинними, слабореактогенними, нетератогенними та імуногенними, що забезпечувалося концентрацією хламідійного компоненту 10^6,5 – 10^7,9 EID₅₀ та бруцелаовісного бактерину у кінцевій концентрації 5 Ч 10⁹ м.к./см³ у вакцині.

9. У щеплених інактивованою біемульсин-вакциною проти хламідійної і бруцелаовісної інфекцій серіями 1, 2, 4, 5 морських свинок формування гуморального імунітету встановлено на 14 - 30 добу після вакцинації. На 14 добу після щеплення в РЗК з хламідійним антигеном виявили антитіла у титрі: 3,0 ± 0,64 log₂, 4,2 ± 0,9 log₂, 2,7 ± 0,54 log₂, 2,11 ± 0,28 log₂ відповідно. Середній показник бруцелаовісних антитіл в РТЗК становив 1,8 ± 0,39 log₂, 4,2 ± 0,9 log₂, 0,33 ± 0,36 log_2, 1,33 ± 0,16 log₂, на 30 добу виявлено зростання титру хламідійних антитіл: 5,6 ± 1,16 log_2, 7,0 ± 1,5 log_2, 3,83 ± 0,91 log_2. 5,6 ± 1,2 log₂ відповідно, протективний титр хламідійних антитіл 1:16 виявлено у 66,7 % - 100 %. Титр бруцелаовісних антитіл в РТЗК становив 3,8 ± 0,82 log₂, 5,2 ± 1,12 log₂, 3,5 ± 0,55 log_2, 2,83 ± 0,5 log₂ відповідно_.. Біемульсин-вакцина захищала всіх щеплених морських свинок проти генералізованої інфекції після експериментального зараження культурою Brucella ovis підшкірно в дозі 2 млрд.м.к./см³. В контрольних групах морських свинок після зараження позитивно реагувало 100 % тварин в РТЗК з середнім показником титру 2,96 ± 0,34 log₂, заражаючу культуру B. ovis реізольовано від 83,9 % тварин, індекс інфікованості 20,7 %.

10. У щеплених баранчиків інактивованою біемульсин-вакциною серія 2 підшкірно в дозі 1,0 см³ антитіла в РТЗК з бруцелаовісним антигеном виявили на 14 добу в титрі 2,18 ± 0,22 log₂ та на 30 добу – 1,45 ± 0,14 log₂ В РІД з бруцелаовісним антигеном на 14 та 30 добу після щеплення позитивно реагувало 100 % тварин, на 73 добу реагувало 72,2 % баранчиків. Хламідійні антитіла в РЗК виявлені у 72,2 % протягом 10 місяців з середнім показником титру по групі 3,12 ± 0,31 log₂. У щеплених 4-х кітних вівцематок антитіла в РТЗК з бруцелаовісним антигеном виявляли протягом 10 місяців (строк спостереження) з середнім показником титру по групі 2,43 ± 0,89 log₂. В РІД реагувало 2 вівцематки протягом 133 діб після щеплення. Хламідійна серопозитивність в РЗК спостерігалася у 75 % тварин протягом 10 місяців з середнім показником титру по групі 4,13 ± 1,16 log₂. У контрольній групі баранчиків після зараження вірулентною культурою Brucella ovis 65939 методом аплікації на слизову препуція та кон’юнктиву очей в дозі 10 Ч 10⁹ м.к./см³ за даними серологічного дослідження заразилося всі 4 тварини, культуру Br. оvis ізольовано у 2-х реагуючих тварин.

11. Щеплення 5 баранчиків інактивованою біемульсин-вакциною серія 3 підшкірно в дозі 1,0 см³ викликало серопозитивність в РТЗК з бруцелаовісним антигеном на 15 добу з середнім показником титру по групі 1,8 ± 0,39 log₂, на 50 добу – 1,6 ± 0,34 log_2, на 80 добу – 2,2 ± 0,47 log₂. Титр хламідійних антитіл після вакцинації на 15 добу сягав 3,8 ± 0,82 log₂, на 50 добу – 1,44 ± 0,3 log_2, на 80 добу – 1,8 ± 0,39 log_2. У контрольній групі баранчиків після зараження вірулентною культурою Brucella ovis 65-і методом аплікації на слизову препуція та кон’юнктиву очей в дозі 10 Ч 10⁹ м.к./см³ за даними серологічного дослідження заразилося всі 4 тварини, культуру Br. оvis ізольовано у 2-х реагуючих тварин.

12. Ревакцинація овець через 9,5 місяців після першого щеплення інактивованою біемульсин-вакциною серія 2 підшкірно в дозі 1,0 см³ стимулювала появу бруцелаовісних антитіл в титрі 1:4 - 1:8 в РТЗК з середнім показником по групі 1,17 ± 0,35 log₂, в РІД реагували всі тварини, титр хламідійних антитіл - 2,6 ± 0,68 log₂. Імунітет встановлено у всіх щеплених тварин після зараження через 3 місяці культурою Brucella ovis 65-і. У контрольній групі за даними серологічних досліджень заразилися всі тварини, культуру Br. ovis ізольовано від 2-х з 3-х баранчиків.

13. Медичний набір «Полімік» виробництва фірми» НВФ «Літех» виявився придатним для індикації ДНК хламідій у полімеразно ланцюговій реакції у виділених нами від овець ізолятах Chlamydophila abortus, а також для контролю хламідійних вакцин.

14. На підставі результатів експериментальних досліджень розроблено лабораторний регламент на виготовлення, контроль та застосування інактивованої біемульсин-вакцини проти хламідійної та бруцелаовісної інфекцій у неблагополучних на подвійну інфекцію вівцегосподарствах.

Публікації автора:

1. Медвідь О.О. Iмунологiчнi зрушення в крові морських свинок, щеплених моно - та біемульсин-вакцинами проти хламідійної й бруцелаовісної iнфекцiй // Пробл. зооінженерії та вет. медицини: б. наук. праць/ ХЗВI.- Х., 2001.- С.192-193.

2. Медвідь О.О., Бабкін А.Ф. Імунологічна активність хламідійного і бруцелаовісного антигену в складі моно - та асоційованих вакцинних препаратів в дослідах на морських свинках// Вет. медицина: Мiжвiд. тематич. наук. зб. - Х., 2002.- Вип. 80.- С.425 - 434.

Дисертанткою виготовлено інактивовану емульсин-вакцину проти ІЕ баранів та біемульсин-вакцину, вивчено імуногенну активність хламідійного і бруцелаовісного антигенів, аналіз отриманих результатів.

3. Бабкін А.Ф., Медвідь О.О. Результати дослідження імуногенності моно - i комбінованих інактивованих емульсин-вакцин проти хламідійної i бруцелаовісної iнфекцiй на морських свинках// Вет. медицина: Мiжвiд. тематич. наук. зб.- Х., 2003.- Вип. 82.- С.59-63.

Дисертантка експериментально обґрунтувала комбіноване щеплення проти інфекційного епідидиміту баранів і хламідіозу, провела експериментальні дослідження, аналіз отриманих результатів.

4. Бабкін А.Ф., Обухівська О.В., Медвідь О.О. Вивчення патогенності польових iзолятiв хламідій// Вет. медицина: Мiжвiд. тематич. наук. зб. - Х., 2003.- Вип. 81.- С.34-40.

Дисертанткою виділено польові ізоляти хламідій, вивчено їх патогенність на курячих ембріонах і білих мишах, проведено аналіз отриманих результатів.

5. Медвідь О.О. Розповсюдження хламідійної iнфекцiї та вивчення iзолятiв хламідій, видалених від овець// Вет.медицина: Мiжвiд. тематич. наук. зб. - Х., 2004.- Вип. 84.- С.479 - 483.

6. Бабкін А.Ф., Стегній Б.Т., Медвідь О.О. Розробка та випробування інактивованої біемульсин-вакцинами проти хламідійної й бруцелаовісної iнфекцiй на вівцях// Вет. медицина: Мiжвiд. тематич. наук. зб. - Х., 2005.- Вип. 85. Т. 1. - С.81 - 88.

Дисертанткою виготовлено експериментальні серії інактивованої біемульсин-вакцини, проведені випробування, аналіз отриманих результатів.

7. Бабкін А.Ф., Медвідь О.О., Дейнеш Б. Імуногенність Brucella ovis штам 67/Б у складі біемульсин-вакцини на основі протихламідійної вакцини фірми Sanofi (Угорщина)// Вет. медицина: Мiжвiд. тематич. наук. зб. - Х., 2005.- Вип. 85. Т. 1 - С.76-87.

Дисертантка провела дослідження імуногенності Brucella ovis штам 67/, у складі вакцини, аналіз отриманих результатів.

8. Деклараційний патент України на корисну модель Інактивована біемульсин-вакцина проти хламідійної та бруцелаовісної інфекцій. Б.Т. Стегній, А.Ф. Бабкін, О.О. Медвідь. - №8006 А61К39/10; Заявл. 27.12.2004; Опубл. 15.07.2005. Бюл. №7. Ст. 2