Анотація до роботи:

Виговська Л. М. Удосконалення системи культивування, зберігання та параметрів контролювання виробничих штамів (Pasteurella, Salmonella, Listeria). — Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наук за спеціальністю 16.00.03 — ветеринарна мікробіологія та вірусологія. Національний науковий центр «Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини», Харків, 2008.

Дисертація присвячена визначенню ролі рівня біологічної активності виробничих штамів мікроорганізмів для використання їх у ветеринарній біотехнології, удосконаленню системи культивування, зберігання та параметрів контролювання виробничих штамів. Проведено вивчення біологічних властивостей виробничих штамів бактерій родів Pasteurella, Salmonella, Listeria, епізоотичних штамів бактерій роду Salmonella. Встановлено відповідність властивостей штамів до паспортних характеристик на основі вивчення індивідуальних біологічних властивостей кожного штаму за культурально-морфологічними, біохімічними, патогенними показниками, визначено чутливість до антибіотиків; розроблені оптимальні поживні середовища для їх культивування; визначено вплив ліофілізації та довгострокового зберігання на біологічні показники та активність культур.

1. У дисертації досліджено ефективність існуючої системи культивування, зберігання та параметрів контролювання виробничих штамів бактерій. На підставі вивчення літературних джерел, культурально-морфологічних, біохімічних, серологічних досліджень, вивчення антибіотикорезистентності, а також результатів біологічного експерименту на лабораторних тваринах теоретично й експериментально обґрунтовано: доцільність використання запропонованих засобів і підходів підтримання бактерій у стабільному стані, впровадження нової рецептури поживних середовищ для відновлення життєздатності бактерій, поетапне відновлення життєздатності ліофілізованих культур, використання нових показників біологічної активності штамів.

2. Вивчено вплив ліофілізації на апараті LP-3 за Р — 4,5 МПа, температури заморожування матеріалу у морозильній камері — мінус 73 С, температурі рефрижератора в LP-3 — мінус 45 С, терміні висушування — 20–24 години, з використанням стабілізуючого середовища Файбіча на штами Pasteurella, Salmonella, Listeria. Визначено, що в процесі ліофілізації штамів Pasteurella, Salmonella втрачається в середньому близько 20 %, Listeria — 20–30 % життєздатних мікробних клітин; в епізоотичних штамів Salmonella з’являються дисоційовані форми (до 5 % R-форм). Рівень ферментативної активності штамів знижується на 50–75 %, LD₅₀ штамів P. multocida, Salmonella підвищується в середньому на 3 lg, окремі штами L. monocytogenes, L. ivanovii втрачають гемолітичну активність. Чутливість штамів до антибактеріальних засобів підвищується в середньому на 25–75 %.

3. Визначено особливості довгострокового зберігання впродовж 10 років бактерій родів Pasteurella і Salmonella: концентрація життєздатних мікробних клітин зменшується в середньому на 10 %, рівень ферментативної активності — на 12,5 %, вірулентність штамів P. multocida — на 2,5–7,0 %.

4. Установлено, що застосування поживних середовищ МПБ, Хотінгера не забезпечує повного відновлення біологічних властивостей ліофілізованих штамів бактерій, а саме: кількість життєздатних мікробних клітин збільшується лише на 10 % відносно ліофілізованих культур, але не набуває вихідного рівня; ферментативна активність підвищується на 12,5–25,0 % відносно ліофілізованих культур, але не набуває вихідного рівня; штами P. multocida і Listeria не утилізують сахари у визначений термін. LD₅₀ штамів P. multocida, Salmonella вища в середньому на 2 lg, ніж до ліофілізації; штами L. monocytogenes, L. ivanovii не відновили гемолітичну активність; чутливість до антибактеріальних засобів штамів бактерій була вищою на 20–65 %, ніж до ліофілізації.

5. Запропоновані нові системи культивування, що забезпечують можливість відновлення вихідних біологічних властивостей ліофілізованих культур та накопичення біомаси в 1,5 раза більше порівняно з культивуванням на МПБ: середовища МПБ, Хотінгера з вмістом сироватки крові (5 %) і глюкози (1 %) для культивування виробничих штамів P. multocida; середовища МПБ, Хотінгера зі вмістом глюкози (1 %), середовища 199 (2 %) та печінкової води за Розановим (5 %) для культивування виробничих штамів бактерій роду Salmonella.

6. Модифікація методу Дрігальського з використанням середовищ МПБ, Хотінгера зі вмістом глюкози (1 %), середовища 199 (2 %), печінкової води за Розановим (5 %) забезпечує звільнення від дисоціюючих форм ліофілізованих епізоотичних штамів Salmonella.

7. Розроблено пропис поживного середовища для культивування штамів Listeria (патент на корисну модель № 29973), використання якого забезпечує підвищення рівня накопичення біомаси в середньому в 1,94 раза порівняно з МПБ, в 1,86 раза — з бульйоном Мартена і в 1,29 раза — з бульйоном Хотінгера. Модифікація вказаного середовища зі вмістом сироватки крові (5 %) та глюкози (1 %) забезпечує відновлення культурально-морфологічних, біохімічних, гемолітичних властивостей, рівня резистентності ліофілізованих штамів до антибіотиків.

8. У результаті проведених досліджень епізоотичних культур роду Salmonella були відібрані штами №№ 1, 4, 8, 10, 62, які використані при розробці і виготовленні вакцини концентрованої інактивованої проти сальмонельозу тварин «Сальмосан». Під час досліджень визначено, що біологічні властивості епізоотичних штамів-кандидатів у виробничі необхідно вивчати комплексно, враховуючи рівень біологічної активності та стабільність біологічних властивостей штаму.

9. Вивчено біологічні властивості 7 штамів лістерій видів L. monocytogenes, L. ivanovii, L. innocua, які за своїми культурально-морфологічними, біохімічними, гемолітичними властивостями і чутливістю до антибактеріальних засобів відповідають вимогам щодо тест-культур і можуть бути використані з метою внутрішньовидової типізації виділених штамів лістерій у САМР-тесті та оцінці якості поживних середовищ для культивування лістерій.

10. Дані, отримані в результаті вивчення антибіотикорезистентності штамів, дали підстави включити цей тест до переліку параметрів контролювання рівня життєздатності і активності штамів.

Публікації автора:

1. Порівняльна характеристика вакцинних і епізоотичних штамів сальмонел / Л. Виговська, В. Прискока, О. Степанюк, М. Павленко [Текст] // Вет. медицина України. — 1997. — № 12. — C. 18–19. (Здобувачем проведено моніторингові дослідження щодо виділення збудників сальмонельозу, аналіз літератури щодо ефективності вітчизняних протисальмонельозних вакцин, виконано та узагальнено частину експериментальних досліджень).

2. Вакцини і штами в системі профілактики захворювань молодняка сільськогосподарських тварин [Текст] / В. А. Прискока, Т. Г. Михальченко, І. В. Риженко, Л. М. Виговська, О. П. Степанюк // Наук. вісник Нац. аграр.
   ун-ту. — К., 1998. — Вип. 11 : Проблеми ветеринарної медицини. —
   C. 142–144. (Здобувачем проведено частину експериментальних досліджень, підбір літературних джерел).

3. Виговська, Л. М. Підхід до профілактики сальмонельозу та колібактеріозу молодняка сільськогосподарських тварин та птиці [Текст] / Л. М. Виговська, Т. Г. Михальченко, О. П. Степанюк // Вісник Сумського держ. аграр. ун-ту. — Суми, 1999. — Вип. 4. — C. 35–36. (Здобувачем проведено вивчення епізоотичної ситуації щодо сальмонельозу тварин в Україні, досліджено біологічні властивості виробничих та епізоотичних штамів сальмонел).

4. Порівняльна характеристика вакцинних і епізоотичних штамів сальмонел [Текст] / Л. М. Виговська, О. П. Степанюк, В. А. Прискока, О. О. Салганська // Аграрний вісник Причорномор’я : зб. наук. пр. — Одеса, 1999. — Вип. 2 (7) : Ветеринарні науки. — C. 50–51. (Здобувач брала участь у проведенні досліджень, в узагальненні та оформленні матеріалів).

5. Выговская, Л. Н. Оценка эпизоотических штаммов сальмонелл с целью их отбора для создания инактивированных вакцин [Текст] / Л. Н. Выговская, Н. А. Пархоменко // Вет. медицина : міжвід. темат. наук. зб. — Х., 2002. — Вип. 80. — C. 152–155. (Здобувач провела аналіз епізоотичної ситуації щодо сальмонельозу тварин в Україні, експериментальні дослідження, виконала підбір літературних джерел, брала участь у оформленні матеріалів).

6. Выговская, Л. Н. Реконструкция рецепторного аппарата у эпизоотических культур сальмонелл [Текст] // Вет. медицина : міжвід. темат. наук. зб. — Х., 2002. — Вип. 80. — C. 149–152.

7. Ушкалов, В. О. Етіологічна структура сальмонельозу свиней в Україні та напрямки вдосконалення засобів специфічної профілактики сальмонельозу [Текст] / В. О. Ушкалов, Л. М. Давидовська // Вет. медицина : міжвід. темат. наук. зб. — Х., 2006. — Вип. 86. — C. 354–358. (Здобувач брала участь у проведенні досліджень, в узагальненні та оформленні матеріалів).

8. Вивчення профілів антибіотикорезистентності виробничих штамів бактерій [Текст] / В. О. Ушкалов, В. С. Тиндик, Л. М. Давидовська, О. О. Салганська, М. Є. Романько // Наук.-техн. бюл. Ін-ту біології тварин ; ДНДКІ вет. препаратів та кормових добавок. — 2007. — Вип. 8, № 3, 4. — C. 317–325. (Здобувачем визначено чутливість до антибактеріальних засобів виробничих штамів Pasteurella multocida i Listeria та узагальнено одержані результати).

9. Національний центр штамів мікроорганізмів ДНКІБШМ: стан і перспективи розвитку [Текст] / А. Головко, В. Ушкалов, Л. Акименко, Л. Давидовська // Вет. медицина України. — 2007. — № 2. — C. 35–36. (Здобувач виконала підбір літературних джерел та приймала участь в оформленні матеріалів).

10. Робота зі штамами мікроорганізмів у ДНКІБШМ [Текст] / Л. Виговська, В. Ушкалов, Л. Акименко, О. Салганська, К. Семко // Вет. медицина України. — 2007. — № 12. — С. 17–19. (Здобувач визначала показники біологічної активності виробничих штамів Pasteurella multocida, брала участь в узагальненні та оформленні матеріалів).

11. Виговська, Л. Сальмонельоз тварин та шляхи вдосконалення засобів специфічної профілактики [Текст] / Л. Виговська, В. Ушкалов, О. Салганська // Вет. медицина України. — 2008. — № 1. — С. 10–12. (Здобувач брала участь у проведенні досліджень, в узагальненні та оформленні матеріалів).

12. Дослідження біологічних властивостей бактерій роду Salmonella при тривалому зберіганні у ліофільному стані [Текст] / В. О. Ушкалов, О. О. Салганська, Л. М. Виговська, В. О. Постоєнко // Вет. біотехнологія : бюл. — К., 2008. — № 12. — С. 276–283. (Здобувач провела аналіз наукової літератури, виконала частину експериментальних досліджень, статистичну обробку отриманих даних, брала участь у оформленні статті та підготовці до друку).

13. Прискока, В. А. Варіанти змішаних інфекцій і їх дія на організм тварин [Текст] / В. А. Прискока, Л. М. Виговська, Т. Г. Михальченко // Проблемы и перспективы паразитоценологии : материалы V Межсъезд. конф. паразитоценологов Украины, Луганск, 29–30 окт. 1997 г. — Х.; Луганск, 1997. — C. 140. (Здобувач брала участь у проведенні досліджень, в узагальненні та оформленні матеріалів).

14. Виговська, Л. М. Особливості серотипізації штамів сальмонел, циркулюючих на Україні [Текст] / Л. М. Виговська, О. П. Степанюк, О. О. Салганська // Наукова спадщина Луї Пастера і ветеринарна медицина України (до 175-річчя від дня народження Луї Пастера) : наук. ст. конф., Рівне, 5–6 лют. 1998 р. — Рівне, 1998. — С. 19–20. (Здобувач брала участь у проведенні досліджень, узагальненні та оформленні матеріалів).

15. Пат. 29973 Україна, МПК (2006) C12N 1/00, C12N 1/20. Мікробіологічне середовище для накопичення бактерій роду Listeria / М. В. Бабкін, О. В. Прохорятова, Н. В. Калашник, В. О. Ушкалов, Л. М. Виговська, М. Є. Романько ; ННЦ «ІЕКВМ». — № u 2007 06530 ; заявл. 11.06.2007 ; опубл. 11.02.2008, Бюл. № 3. — 4 с.