Дівоча В. П. Біолого – вірусологічне обґрунтування антипротеазної терапії грипу. – Рукопис.
Дисертація на здобуття наукового ступеня доктора медичних наук за спеціальністю 14.01.32 – медична біохімія. – Національний медичний університет ім. О. О. Богомольця. - Київ, 2008.
Дисертація присвячена вивченню взаємодії протеолітичної системи клітини – господаря з вірусом грипу, який розмножується в ній. В роботі започатковується новий напрямок боротьби з грипозною інфекцією, заснований на блокуванні вірусу в міжклітинному просторі або при його побудові в самій клітині шляхом використання специфічних антипротеїназних сироваток та/або інгібітору трипсиноподібної протеїнази.
Встановлено: 1. здатність інгібітору трипсиноподібних протеїназ, одержаного з легенів здорових мишей блокувати розмноження вірусу грипу in vivo в перші години після зараження; 2. подавлення інфекційного грипозного процесу під дією антипротеїназної імунної сироватки до третьої ізоформи трипсиноподібної протеїнази in vitro та in vivo.
Запропоновано: 1. спосіб одержання інгібітору трипсиноподібної протеїнази з легень здорових мишей; 2. використання даного інгібітору як противірусного препарату; 3. спосіб лікування грипу в експерименті шляхом введення інгібітору протеїназ або антипротеїназної сироватки; 4. біоматеріал для виробництва даного інгібітору як противірусного препарату для людей; 5. спосіб визначення захисних можливостей в експерименті.
В роботі теоретично обґрунтована і експериментально підтверджена методологія і методика нового підходу одержання препарату для антивірусної терапії грипу.
1. Очищення і концентрування вірусу грипу методами центрифугування не звільняли вірус грипу від білків з протеїназною активністю. Доочищення вірусу грипу в східчастому градієнті сахарози показало, що в зоні 38-43 % концентрації сахарози локалізувалася основна кількість вірусу грипу і велика частина протеолітичної активності. Асоційована з вірусом грипу протеїназа в градієнті сахарози розділяється на чотири ізоформи, а протеїназа з нормальних хоріоналантоїсних оболонок – на три ізоформи, активність яких була у 345 разів нижча, чим у вірусіндукованих.
Елюція і адсорбція вірусу грипу на формалінізованих еритроцитах показали, що протеолітична активність не пов'язана з V- антигеном, а, скоріше, пов'язана з РНП.
Метод электрофорезу в ПААГі вірусу грипу в невідновлюваних умовах показав чітке розділення протеїнази на 7-9 фракцій, які мали високу протеолітичну активність і різний електричний заряд. Схожий ферментний профіль в елюатах ПААГ був виявлений і в нормальній алантоїсній рідині, але її протеолітична активність була значно нижча і ця протеїназа швидше зникала.
2. Протеїназа, асоційована з вірусом грипу, є клітинним ферментом, оскільки імунні сироватки до нормальних хоріоналантоїсних оболонок курячого ембріону нейтралізували протеїназу в зоні 35-45% сахарози, де локалізувався очищений вірус грипу, а гемаглютинуюча активність зберігалася.
3. Рівень трипсиноподібної протеїнази і інгібітору в легенях і сироватці крові незаражених мишей і в хоріоналантоїсній рідині (2-х денних) курячих ембріонах знаходилися в рівновазі на досить високому рівні і не мали значних змін протягом всього періоду спостереження (6 діб). При зараженні білих мишей вірусом грипу А відбувалось порушення ферментно-інгібуючого балансу. Найбільші зміни відбувались в перші години після зараження. Зниження протеїназної активності в перші години після зараження супроводжується збільшенням інгібуючої протеїназу активності.
4. При зараженні курячих ембріонів вірусом грипу А в перші години відбувається збільшення як протеїназної, так і інгібуючої активності. В легенях заражених мишей і в курячих ембріонах є відповідність між накопиченням інфекційного потомства і наступаючим зниженням протеїназної та інгібуючої активності. При зараженні мишей вірусом грипу В профіль протеїназної активності не був так різко виражений в легенях і мав відмінності в порівнянні з вірусом грипу А, схожими були тільки перші години після зараження.
5. Вірус-індукованний клітинний інгібітор в перші години після зараження відіграє важливу роль в блокуванні протеїнази. Після його виснаження головну роль в розвитку інфекції беруть на себе трипсиноподібні протеїнази, які починають розщеплювати гемаглютинін, у зв’язку з чим відбувається зростання інфекційного титру.
6. Великі і малі заразні дози вірусу грипу А викликають неоднакові зміни протеїназної і інгібуючої активності. Великі дози в період максимального накопичення інфекційної і гемаглютинуючої активності повністю пригнічують протеїназну та інгібуючу активність, невеликі дози – підвищують протеїназну активність і мало змінюють інгібуючу активність. Ступінь накопичення інфекційного вірусу не залежить від дози вірусу, але при малій дозі – подовжується час накопичення інфекційного потомства.
Для виділення трипсиноподібної протеїнази з легенів заражених мишей, потрібно брати тварин через 72 години після зараження, тому що у цей період накопичується її максимальна кількість.
7. З легенів незаражених мишей виділено шість ізоформ трипсиноподібної протеїнази, із заражених вірусом грипу – вісім ізоформ, які мають високу протеолітичну активність. При вивченні фізико-хімічних властивостей ізоформ трипсиноподібних протеїназ встановлено, що інгібітори трипсину: триелин, овомукоїд, інгібітор з ячменю і Е-АКК не однаково інгібують протеїназну активність.
Оптимальний рН ізоформ, виділених з легенів незаражених мишей, знаходиться в 7,0-8,0, тоді як рН ізоформ, виділених із заражених легенів, відхилявся в кислу сторону (4,0-5,0).
При визначенні молекулярної маси ізоформ клітинної трипсиноподібної протеїнази було встановлено, що вони не гомогенні і містять низькомолекулярні білки. Так, II і IV ізоформи містили по два білка, а III і VI ізоформи відрізнялись тільки одним білком масою 31 000 Да, який реєструвався в III ізоформі. I, II і III ізоформи, виділені із заражених легенів, на електрофореграмі не виявлялися, а в IV, V і VI ізоформах відбувалася заміна білків з іншою молекулярною масою.
8. Встановлено, що розщеплення гемаглютиніну вірусу грипу на дві суб’одиниці відбувається під впливом VI ізоформи трипсиноподібної протеїнази, виділеної з легенів здорових мишей (в наших умовах), а наростання інфекційної активності відбувається під дією III ізоформи трипсиноподібної протеїнази, виділеної з легенів здорових мишей. Ізоформи виділені з легенів мишей, заражених вірусом грипу А, через 72 години після зараження не володіли здатністю підвищувати інфекційний титр вірусу.
9. Антипротеїназні імунні сироватки до ізоформ трипсиноподібної протеїнази, виділених з легенів незаражених мишей, блокували активність трипсину, і вірус грипу не розмножувався в культурі кліток МДСК. In vivo виявлено зниження летальності мишей на 60% тільки при дії антисироваток до III ізоформи.
10. З легенів здорових мишей виділено інгібітор трипсиноподібних протеїназ з молекулярною масою 47 500 Да, який пригнічував розвиток інфекційної і гемаглютинуючої активності вірусу грипу на курячих ембріонах, а також блокував розвиток грипозної інфекції у білих мишей в загальній дозі 0,126 мкг/мишу.
11. Обґрунтована можливість та розроблена методика одержання антивірусного препарату з промислових відходів гама-глобулінового виробництва.
Публікації автора:
Періодичні фахові видання, затверджені ВАК України (*- особистий внесок здобувача)
Дивоча В. А.FAB-фрагмент гетерологического иммуноглобулина для профилактики и лечения гриппа / В. А. Дивоча, В. И. Дегтяренко., В. Ф. Зеваков, И. М. Максименко// Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 1985. - № 4. - С. 114-115. (*изучен лечебно-профилактический эффект препарата Fab-фрагмента гетерологического противогриппозного иммуноглобулина при экспериментальном гриппе у мышей).
Дивоча В. А. Изменение протеазной активности в лёгких мышей, заражённых вирусом гриппа А / В. А. Дивоча, И. Г Григорьева, А. Г. Букринская// Вопросы вирусологии. - 1990. - № 5.- С. 370-377. (* изучена динамика изменения протеиназной и ингибирующей активности в организме белых мышей зараженных вирусом гриппа A/PR/8/34 и проведен анализ результатов).
Дивоча В. А.Изменение протеазной активности в лёгких и сыворотке крови мышей, заражённых вирусом гриппа В / В. А. Дивоча, И. Г. Григорьева, А. Г. Букринская// Вопросы вирусологии. - 1992. - № 3.- С. 176. - Деп. в ВИНИТИ 28.10.91, № 4106-В. (* изучена динамика изменения протеиназной и ингибирующей активности в процесе развития вирусной инфекции в организме белых мышей зараженных вирусом гриппа В, проведен анализ и описаны результаты).
Патент 23548 А Україна, МПК6 А 61 К 35/00. Спосіб одержання інгібітору трипсіноподібних протеаз / Дівоча В. А. ; заявник та патентодержатель Дівоча В. А. - № 97052520 ; заявл. 30.05.97 ; опубл. 02.06.98, Бюл. № 4.
Дівоча В. О. Клітинні компоненти, асоційовані з вірусом грипу / В. О. Дівоча// Одеський медичний журнал. - 1998. - № 2 (46). - С. 8-10.
Дівоча В. О. Вірус грипу і ферменти клітини / В. О. Дівоча// Експериментальна і клінічна медицина. - 1999. - № 2. - С. 100-105.
Дівоча В. О. Зміни у курячому ембріоні під дією вірусу грипу / В. О. Дівоча// Одеський медичний журнал. - 2000. - № 3 (59). - С. 16-19.
Дівоча В. О.Трипсіноподібні протеази крові людини — основа для одержання противірусних препаратів / В. О. Дівоча, М. Т. Мікелашвілі, Е. М. Вількінська// Фізіологічний журнал. - 2000. - T. 46, № 2. - С. 78. (*вивчено наявність трипсиноподібної протеїнази у еритроцитарній масі, сироватці та у плазмі донорської крові людини, проаналізовано та описано результати).
Дівоча В. О.Дія інгібітора трипсиноподібних протеаз на грипозну інфекцію в експерименті / В. О. Дівоча, М. Т. Мікелашвілі, В. Н. Михальчук// Інфекційні хвороби. - 2001.- № 2. - С. 35-39. (* виділено інгібітор трипсиноподібних протеїназ з легенів дужих мишей, очищено за допомогою афінної хроматографії на трипсин-сефарозі 4В, та сефадексах G-15, G-50. Вивчена його захисна дія).
Дівоча В. О. Роль протеолітичної системи клітини-господаря на ранніх стадіях розвитку вірусної інфекції / В. О. Дівоча., М. Т. Мікелашвілі, В. Н. Михальчук// Медична хімія. - 2001. – T. 3, № 1.- С. 78-80. (* проаналізовано літературні дані про розуміння регуляторної функції протеолітичних ферментів серед вірусів різних таксономічних груп).
Дівоча В. О.Виділення та очищення трипсиноподібної протеази з легенів білих мишей / В. О. Дівоча, Ю. Г. Сова, В. М. Михальчук// Медична хімія. - 2001. – T. 3, № 3.- С. 73-77. (* розроблена методика виділення та очищення трипсиноподібних протеїназ з легенів дужих мишей та інфікованих вірусом грипу A/PR/8/34, проаналізовано та описано результати).
Дівоча В. О. Вивчення фізико-хімічних властивостей ізоферментів трипсиноподібних протеаз /В. О. Дівоча, Ю. Г. Сова, В. М. Михальчук // Медична хімія. - 2001.- T. 3, № 4.- С. 31-34. (* вивчена характеристика ізоферментів трипсиноподібних протеїназ одержаних з легенів білих мишей, проаналізовано та описано результати).
Деклараційний патент 37324 А Україна, МПК6 А 61 К 31/14. Інгібітор трипсіноподібних протеаз як антивірусний засіб / Дівоча В. А.; заявник та патентодержатель Дівоча В. А. - № 97115416 ; заявл. 12.11.1997 ; опубл. 15.05.2001, Бюл. № 4.
Деклараційний патент 34084 А Україна, МПК6 А 61 В 10/00. Спосіб визначення захисних можливостей організму в експерименті /Дівоча В. А.; заявник та патентодержатель Одеський державний медичний університет - № 99062998 ; заявл. 01.06.1999 ; опубл. 15.02.2001, Бюл. № 1.
Дівоча В. О. Наявність трипсиноподібної протеази та її інгібітору в донорській крові людини / В. О. Дівоча// Одеський медичний журнал. – 2002. - № 1 (69). - С. 16-19.
Дівоча В. О.Трипсиноподібні протеази крові людини — основа для отримання противірусних препаратів / В. О. Дівоча, В. М. Михальчук// Медична хімія. - 2002.- T. 4, № 1. - С. 74-76. (* досліджено наявність трипсиноподібної протеїнази у донорській крові людини, проаналізовано та описано результати).
Дівоча В. О. Захисна дія антипротеазних сироваток / В. О. Дівоча// Одеський медичний журнал. - 2002. - № 3 (71).- С. 14-17.
Дівоча В. О. Вивчення особливостей протеолітичної активності протеази, асоційованої з вирусом грипу / В. О. Дівоча// Одеський медичний журнал. – 2002. - № 6 (74). - С. 22-26.
Дівоча В. О. Вивчення протеолітичної активності вірусу грипу в процесі очищення методами центрифугування / В. О. Дівоча// Одеський медичний журнал. - 2003. - № 1 (75). - С. 16-19.
Дівоча В. О. Зв’язок V-антигену і РНП вірусу грипу з протеазою / В. О. Дівоча, В. М. Михальчук // Інфекційні хвороби. - 2003. - № 2. – С. 27-30. (* виділено та очищено V-антиген та РНП вірусу грипу, проаналізовано та описано результати).
Михальчук В. Н.Наявність трипсиноподібної протеази та її інгібіторів у відходах отримання гамма-глобуліну / В. Н. Михальчук, В. А. Дівоча, А. І. Гоженко// Медична хімія. - 2006. – Т. 8, № 1. - С. 60-63.
Михальчук В. Н.Наличие протеазы и ингибитора в вакцинах и коммерческих препаратах крови / В. Н. Михальчук, В. А. Дівоча, А. И. Гоженко// Вісник наукових досліджень. – 2006. - № 1. – С. 87-89.
Михальчук В. М.Динаміка зміни протеолітичної активності ферментів у процесі розвитку вірусу грипу В / В. М. Михальчук, В. П. Дівоча, А. І. Гоженко// Вісник наукових досліджень. – 2006. – № 4. – С. 51-53.
Михальчук В. Н.Молекулярно-биологическое обоснование антипротеазной терапии гриппа / В. Н. Михальчук, В. А. Дівоча, А. И. Гоженко// Фундаментальные исследования. – 2007. - № 12. – С. 120-121.
Михальчук В. Н.Польза и вред профилактических и лечебных препаратов против гриппа / В. Н. Михальчук, В. А. Дівоча, А. И. Гоженко// Современные наукоемкие технологии. – 2007. - № 7. – С. 92.
Патент 21599 Україна, МПК (2006), А 61 К 36/00. Спосіб виділення інгібітора трипсиноподібних протеаз із відходів одержання гаммаглобуліну та альбуміну донорської крові людини / Дівоча В. П., Михальчук В. М., Гоженко А. І.; заявник та патентодержатель Дівоча В. П., Михальчук В. М., Гоженко А. І. - № u 2006 11233 ; заявл. 25.10.2006 ; опубл. 15.03.2007, Бюл. № 3.
Тези, які опубліковані в інших виданнях
Дивоча В. А. Клеточная протеаза вируса гриппа / В. А. Дивоча, В. И. Дегтяренко, В. Ф. Зеваков// 2-й Съезд инфекционистов УССР, Донецк, 15-17 сентября 1983 г. : тезисы докл. – Киев, 1983. – С. 36-38.
Дивоча В. А. Изучение влияния антипротеазных иммуноглобулинов при гриппозной инфекции / В. А. Дивоча// Актуальные вопросы иммунотерапии : науч. конф., ноябрь 1988 г. : тезисы докл. – Ворошиловоград, 1988.- С. 43.
Дивоча В. А. Действие антипротеазных сывороток при экспериментальном гриппе / В. А. Дивоча/ Актуальные проблемы прикладной иммунологии, биотехнологии и производства бактерийных препаратов : науч. конф., октябрь 1988 г. : тезисы докл. – Пермь, 1988. - С. 174-175.
Divocha V. A.Changes in protease activity in the langes of mice infected with influenza A virus / V. A. Divocha, I. G. Grigorjeva, A. G. Bukrinskaja// J. Life Sciences. - 1989.- V.3, F. 38. - P. 90.
Дивоча В. А. Изменение протеазной активности в лёгких и сыворотке крови белых мышей, заражённых вирусом гриппа А и В / В. А. Дивоча, И. Г. Григорьева// Лабораторные животные для медико-биологических и биотехнологических исследований : науч. конф., Владимир, 20-22 ноября 1990 г. : тезисы докла. - Москва, 1990. - С. 47.
Дивоча В. А. Клеточная трипсиноподобная протеаза – маркер качества очистки вируса гриппа / В. А. Дивоча// Актуальные вопросы медицинской биотехнологии : науч. конф., 17-19 сентября 1991 г. : тезисы докл. – Томск, 1991. - С. 52.
Дивоча В. А. Защитная роль новых ингибиторов трипсина при летальном гриппе / В. А. Дивоча// Научные достижения и проблемы производства лекарственных средств : науч. конф., 20-22 сентября 1995 г. : тезисы докл. - Х., 1995. - С. 188.
Дивоча В. А. Антивирусное действие клеточного ингибитора /В. А. Дивоча, С. В. Вовчук, В. Г. Адамовская// Научные достижения и проблемы производства лекарственных средств : науч. конф., 1995 г. : тезисы докл. – Харьков, 1995. - С. 189-190.
Дивоча В. А. Использование радиоактивных веществ для разработки новых противовирусных препаратов / В. А. Дивоча// Науково-практичні проблеми променевої діагностики та терапії : науч. конф., 1995 г. : тези доп. – Харьков, 1995. - С. 21.
Дивоча В. А. Защитная роль антипротеазных иммунных сывороток при экспериментальном гриппе / В. А. Дивоча, Ю. Г. Сова, М. Т. Микелашвили// Идеи И. И. Мечникова и развитие современного естествознания : науч. конф., 28-30 ноября 1995 г. : тезисы докл. – Харьков, 1995. - С. 102-103.
Дивоча В. А.Изучение характеристики клеточных трипсиноподобных протеаз, участвующих в процессе развития гриппозной инфекции / В. А. Дивоча, С. В. Вовчук, В. Г. Адамовская// Идеи И. И. Мечникова и развитие современного естествознания : междунар. конф., 1995 г. : тезисы докл. – Харьков, 1995. - С. 101.
Дивоча В. А. Антивирусное действие клеточного ингибитора / В. А. Дивоча, С. В. Вовчук, В. Г. Адамовская, Ю. Г. Сова, М. Т. Микелашвили// Гомеостаз и инфекционный процесс : междунар. конф., 10 -12 сентября 1996 г. : тезисы докл. – Саратов, 1996. – Ч. 3. - С. 8.
Дивоча В. А. Протеолитические ферменты лёгких ассоциированные с вирусом гриппа / В. А. Дивоча, М. Т. Микелашвили, Ю. Г. Сова, В. Г. Адамовская// Материалы XIII съезда микробиологов, эпидемиологов и паразитологов, 9-11 жовтня 1996 р. : зб. актуальні проблеми мікробіології, епідеміології, паразитології та профілактики інфекційних хвороб. - Винница, 1996. - С. 147-148.
Дівоча В. О.Вивчення дії клітинного інгібітору на розвиток вірусу грипу / В. О. Дівоча, С. В. Вовчук, В. Г. Адамовська// XIII з’їзд українського наукового товариства мікробіологів, епідеміологів та паразитологів ім. Д. К. Заболотного, Вінниця, 9-11 жовтня 1996 р. : зб. актуальні проблеми мікробіології, епідеміології, паразитології та профілактики інфекційних хвороб. – Київ – Вінниця, 1996.- С. 146-147.
Дівоча В. О. Клітинні протеази — мішені по створенню противірусних препаратів / В. О. Дівоча// Досягнення вчених інституту з проблем епідеміології, мікробіології, вірусології та інфекційних хвороб : наук.-практ. конф., 1996 р. : тези доп. – Київ, 1996. - С. 17.
Дівоча В .О. Протеолитические ферменты — в противогриппозных вакцинах /В. О. Дівоча// Досягнення сучасної фармації — в медичну практику : наук.-практ. конф., присвяченої 75-річчю Української Фармацевтичної Академії, 1996 р. : тези доп. - Харків, 1996. - С. 96-97.
Дивоча В. А.Противовирусное действие ингибитора трипсина из ячменя / В. А. Дивоча, С. В. Вовчук, А. Г. Адамовская// Досягнення сучасної фармації — в медичну практику : наук.-практ. конф., 1996 р. : тези доп. – Харків, 1996. - С. 196.
Дивоча В. А. Защитные силы организма против вирусных инфекций / В. А. Дивоча, М. Т. Микелашвили, Ю. Г. Сова// Современные достижения валеологии и спортивной медицины, Одесса, 20-23 сентября 1997 г. : материалы IV науч.-практич. конф. : тезисы докл. – Киев, 1997. – С. 160.
Дивоча В. А. Клеточные протеазы — мишень для создания противовирусных препаратов / В. А. Дивоча, В. Г. Адамовская, П. С. Тихонов, М. Т. Микелашвили, Ю. Г. Сова// Перспективы 2’98 : наук.-техніч. конф., 21-22 травня 1998 р.: тези доп. – Одесса, 1998. - № 2. - С. 42. (* изучена роль трипсиноподобных протеаз и их ингибиторов в развитии гриппозной инфекции у белых мышей, проведен анализ и описаны результаты).
Дивоча В. А.Протеаза крови в инфекционном процессе / В. А. Дивоча, М. Т. Микелашвили, Ю. Г. Сова// Гомеостаз и инфекционный процесс : науч. конф., 1998 г. : тезисы докл. - Саратов, 1998. - С. 12.
Дівоча В. О. Інгібітор трипсиноподібних протеаз у ролі противірусних факторів / В. О. Дівоча// Впровадження ефективних лікарських засобів у терапевтичну практику : наук.-практ. конф., 28 вересня 1999 р. : тези доп. – Вінниця, 1999. - С. 87.
Дівоча В. П.Трипсиноподібні протеази крові людини – основа для одержання противірусних препаратів / В. П. Дівоча., М. Т. Мікелашвілі, Е. М. Вількінська// Фізіологічний журнал : матеріали III Національного Конгресу патофізіологів України. – Одеса, 2000. - Т. 46, № 2 (додаток). – С. 78.
Деклараційний патент 34700 А Україна, МПК6 А 61 N 5/06, А 61 N 5/02. Спосіб лікування грипу в експерименті / Дівоча В. А.; заявник та патентодержатель Одеський державний медичний університет - № 99042013 ; заявл. 09.04.1999 ; опубл. 15.03.2001, Бюл. № 2.
Дівоча В. О.Наличие ингибитора трипсиноподобных протеаз в донорской крови человека и в отходах сывороточного производства / В. О. Дівоча, М. Т. Мікелашвілі// Естествознание на рубеже столетий : междунар. конф., Сочи, 8-10 октября 2001 г. : тезисы докл. – Москва, 2001. - Т. 3.- С. 63.
Дивоча В. А. Перспектива создания противовирусных средств на основе ингибиторов клеточных протеаз / В. А. Дивоча, А. И. Гоженко// Актуальные вопросы борьбы с инфекционными болезнями : междунар. науч. конф., 23-24 октября 2003 г. : тезисы докл.– Харьков, 2003.– С. 29.
Дивоча В. А. Молекулярно-биологическое обоснование антипротеазной терапии гриппа / В. А. Дивоча, В. Н. Михальчук, А. И. Гоженко// III-і читання ім. В. В. Підвисоцького : наук. конф., 27-29 травня 2004 р. : тези доп. – Одеса, 2004. - С. 33-34.
Дивоча В. А. Наличие протеазы и ингибитора в вакцинах и коммерческих препаратах / В. А. Дивоча, В. Н. Михальчук, А. И. Гоженко// Бюлетень IV читань ім. В. В. Підвисоцького : наук. конф., 26-27 травня 2005 р. : тези доп. – Одеса, 2005. - С. 73-74.
Дівоча В. П. Динаміка зміни активності протеолітичних ферментів у процесі розвитку вірусу грипу В /В. П. Дівоча, В. Н. Михальчук, А. І. Гоженко// Бюлетень V читання ім. В. В. Підвисоцького : наук. конф., 25-26 травня 2006 р. : тези доп. – Одеса, 2006. - С. 68-69.
