Анотація до роботи:

Ковалевська Л.М. Експресія протеїнкінази D2 в нормальних та злоякісно трансформованих В-лімфоцитах людини. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 14.01.07 – онкологія. Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України, Київ - 2009.

Дисертація присвячена вивченню експресії, аутофосфорилювання та внутрішньоклітинної локалізації серин/треонін протеїнкінази D2 (PKD2) в нормальних та злоякісно трансформованих В-лімфоцитах людини. Показано, що як на рівні мРНК, так і на рівні білку В-лімфоцити людини експресують PKD2, а не PKD1.

Були досліджені рівні експресії та аутофосфорилювання PKD2 в різних субпопуляціях нормальних В-лімфоцитів. Виявлено антиген залежну активацію PKD2 як в нормальних, так і в злоякісно трансформованих В-клітинах. Показано, що при ВКР-індукованій активації В-клітин відбувається внутрішньоклітинна релокалізація PKD2 з цитоплазми до ядра.

На біопсійному матеріалі було показано, що для злоякісно трансформованих клітин при лімфомі з малих лімфоцитів, лімфомі з клітин мантійної зони та лімфомі Беркітта спорадичного типу характерним є помірний рівень експресії PKD2 та низький рівень її аутофосфорилювання. При класичній лімфомі Ходжкіна високий рівень експресії та аутофосфорилювання PKD2 відмічено в цитоплазмі та ядрі переважно в клітинах Ходжкіна та Березовського-Штернберга.

Дифузні крупноклітинні В-клітинні лімфоми (ДКВЛ) були гетерогенними за внутрішньоклітинною локалізацією, рівнем експресії і аутофосфорилюванням PKD2. Нами було виділено три групи ДКВЛ, злоякісні клітини яких мали різний рівень диференціювання і відрізнялись за внутрішньоклітинною локалізацією, рівнем експресії і аутофосфорилюванням PKD2 і експресією PKCbII, яка, як відомо, є прогностичним маркером для даної форми лімфом.

Лігація ВКР та стимуляція РМА/іономіцином в пухлинних В-клітинних лініях з надекспресією PKCІІ призводила до підвищення рівня фосфорилювання PKD2 та гістондеацетилаз, які є субстратом кіназ родини PKD.

В дослідах in vitro з’ясовано, що PKD2 бере участь в антиген-індукованій активації NF-kB в злоякісно трансформованих клітинах. Нами виявлено синергізм PKD2 з CARMA1 при активації канонічного CARMA1-NF-kB каскаду, який повністю залежить від кіназної активності PKD2.

В результаті комплексного дослідження встановлено, що рівень експресії, аутофосфорилювання та внутрішньоклітинна локалізація PKD2 залежать від рівня диференціювання та активації нормальних і злоякісно трансформованих В-лімфоцитів. Підвищення активності PKD2 в злоякісно трансформованих лімфоцитах може сприяти виживанню пухлинних клітин шляхом активації NF-kB сигнального каскаду.

1. Встановлено, що в нормальних та злоякісно трансформованих В-лімфоцитах людини експресована PKD2, а не PKD1.

2. З’ясовано, що окремі субпопуляції зрілих В-лімфоцитів людини відрізняються за рівнем експресії PKD2. Найвищий рівень експресії PKD2 відмічено в плазмабластах та В-клітинах пам’яті, а найнижчий - в плазматичних клітинах. Виявлена залежність між стадією диференціювання первинних В-лімфоцитів і рівнем аутофосфорилювання PKD2.

3. Виявлено BКР-залежну активацію та релокалізацію PKD2 з цитоплазми до ядра в нормальних і злоякісно трансформованих В-лімфоцитах людини.

4. З‘ясовано, що для злоякісно трансформованих клітин хворих на лімфому з малих лімфоцитів, лімфому з клітин мантійної зони та лімфому Беркітта спорадичного типу характерна цитоплазматична експресія PKD2 та низький рівень її аутофосфорилювання. При лімфомі Ходжкіна високий рівень експресії та аутофосфорилювання PKD2 виявлено переважно в цитоплазмі та ядрі клітин Ходжкіна та Березовського-Штернберга.

5. Виділено три групи хворих на дифузну крупноклітинну В-клітинну лімфому, злоякісні клітини яких мають різний рівень диференціювання і відрізняються за внутрішньоклітинною локалізацією, рівнем експресії і аутофосфорилюванням PKD2 і експресією відомого прогностичного маркера цього гістологічного варіанта лімфом – PKCbII.

6. Встановлено, що надекспресія PKCbII в злоякісно трансформованих В-клітинах призводить до підвищення рівня активації PKD2 і фосфорилювання HDAC.

7. З’ясовано, що надекспресія PKD2 підвищує рівень антиген-індукованої активації NF-kB. Показано синергізм дії PKD2 з CARMA1 в активації NF-kB, що повністю залежить від кіназної активності PKD2.

Публікації автора:

1. Immunohistochemical studies of protein kinase D (PKD) 2 expression in human lymphomas / L.M.Kovalevska, O.V. Yurchenko, L.M. Shlapatska, G.G. Berdova, S.V. Mikhalap, J. Van Lint, S.P. Sidorenko // Experimental Oncology. – 2006. – V. 25, № 3. – P. 186-190. (Особистий внесок дисертанта: імуногістохімічні та біохімічні дослідження, участь в аналізі результатів та написанні статті).

2. Експресія та аутофосфорилювання протеїнкінази D2 в дифузних В-крупноклітинних лімфомах / Л.М. Ковалевська, О.В. Юрченко, С.В. Міхалап, Л.М. Шлапацька, Г.Г. Бердова, Е.М. Алексик, С.П. Сидоренко // Онкологія.- 2008. - T. 10, № 2. - C. 221-224. (Особистий внесок: імуногістохімічні дослідження, участь в аналізі результатів та написанні статті).

3. Протеїнкіназа D2 (PKD2) бере участь в TCR-опосередкованому сигнальному каскаді активації ядерного фактору транскрипції NF-kB / Л.М. Ковалевська, С.В. Міхалап, Л.М. Шлапацька, Г.Г. Бердова, Д.Дж. Ролінгс, М.Морено-Гарсія, С.П. Сидоренко // Укр. журнал гематології та трансфузіології. - 2008 - Т. 8, № 4, -C. 15-19. (Особистий внесок: люциферазний аналіз активності NF-kB, участь в аналізі результатів та написанні статті).

4. Міхалап С.В. Kінази родини PKD у регуляції посттрансляційних модифікацій білків / С.В. Міхалап, Л.М. Ковалевська, С.П. Сидоренко // Укр. Біохім. Журнал. - 2008, Т. 80. № 4, C. 13-20. (Особистий внесок: автор здійснив пошук наукової літератури за темою огляду).

5. Evaluation of activated serine/theonine kinase PKD in normal and malignant lymphocytes in situ / L.М. Kovalevska, O.V. Yurchenko, G.G. Berdova, S.V. Mikhalap // The FEBS Journal. -2003. -V. 270, № 1. - P. 189.

6. The level of PKD expression and phosphorylation in lymphocytes / L.М. Kovalevska, O.V. Yurchenko, G.G. Berdova, S.V. Mikhalap, J. Van Lint., S.P. Sidorenko // Abstract book Conference for young scientists of molecular biology and genetics.- Кyiv, Ukraine, 2003. -P.160.

7. The role protein kinases D in B cell signaling / S.V. Mikhalap, L.M. Kovalevska, O.V. Yurchenko, J.R.Vandenheede, J. Van Lint, T. Seufferlein, S.P. Sidorenko // Український біохімічний журнал. - 2005. – T. 77, № 2. - C. 27.

8. Експресія і активність PKD2 при неходжкінських злоякісних лімфомах / С.В. Міхалап, Л.М. Ковалевська, О.В. Юрченко, Г.Г. Бердова, С.П. Сидоренко // Гематологія і трансфузіологія: фундаментальні та прикладні питання. -2005, - T. 5, № 4. -Р.53-54.

9. Визначення рівня експресії та фосфорилювання протеїнкінази D2 in situ / Л.М. Ковалевська, С.В. Міхалап, О.В. Юрченко, Г.Г. Бердова, С.П. Сидоренко // Тези VII Міжнародної конференціі молодих онкологів „Сучасні проблеми експериментальної і клінічної онкології”. - Київ, 2006. – C. 42.

10. Протеїнкіназа D2 (PKD2) приймає участь в сигнальному каскаді активації ядерного фактора транскрипції NF-kB / Л.М. Ковалевська, Л.М. Шлапацька, С.В. Міхалап, М. Морено-Гарсія, К. Соммерс, Д.Дж. Ролінгс, С.П. Сидоренко // Збірник тез 2-го з’їзду Українського товариства клітинної біології. Київ, 2007. -С.158.

11. The role of protein kinase D2 in BCR mediated signaling in normal and malignant B lymphocytes / S.P. Sidorenko, S.V. Mikhalap, L.M. Kovalevska, L.M. Shlapatska, G.G. Berdova, D.J. Rawlings // In: 14th symposium on signals and signal processing in the immune system. Balatonoszod, Hungary. – 2007. -Р. 56.

12. PKD2 expression and autophosphorylation in primary normal B lymphocytes and diffuse large B cell lymphomas / L. Kovalevska, S. Mikhalap, O. Yurchenko, G. Berdova, S. Sidorenko // Acta Biochimica Polonica. Poland. -2007. - V. 54, № 2. - Р. 20.

13. Експресія та функції протеїнкінази D2 в нормальних та злоякісно трансформованих В-лімфоцитах / Л.М. Ковалевська, С.В. Міхалап, О.В. Юрченко, Л.М. Шлапацька, Г.Г. Бердова, С.П. Сидоренко // Тези доповідей конференції „Актуальні проблеми біохімії та біотехнології - 2008”. - Київ, Україна. - 2008. - С. 20.

14. Kinases of PKD family as a potential object of translational research in oncology / S.P. Sidorenko, L.M. Kovalevska, M.Y. Shabelnik, G.G. Berdova, L.M. Shlapatska, S.V. Mikhalap // Abstracts of international conference “Tumor hypoxia and malignant progression”. Kiev, Ukraine. -2008. -P.20.