Анотація до роботи:

Подольнікова Н.П. Ідентифікація та характеристика сайтів зв’язування у gC-домені фібриногену з тромбоцитарними інтегринами. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.04 - Біохімія.- Інститут біохімії ім О.В. Палладіна НАН України. Київ, 2004.

Дисертація присвячена визначенню та характеристиці сайтів зв’язування у gC-домені фібриногену з тромбоцитарними інтегринами.

Взаємодія між тромбоцитарним інтегрином a_IIbb₃ та фібриногеном опосередковує декілька реакцій: агрегацію тромбоцитів, ретракцію фібринового згустка та адгезію тромбоцитів, які необхідні для утворення повноціного тромбу. Ділянка для зв’язування з a_IIbb₃ розташована у gС-домені молекули фібриногену. Ідентифікувано нову послідовність у gС-домені, g370-383 (Р3) для зв’язування з a_IIbb₃. Пептид, що дуплікував цю послідовність, інгібував ретракцію фібринового згустку та підтримував адгезію тромбоцитів. За допомогою бібліотеки пептидів відповідних ділянкам Р3 і мутаційного аналізу gС-домену було показано, що декілька амінокислот, Lys³⁷³, Arg³⁷⁵, Lys³⁸⁰, Lys³⁸¹, є критичними для взаємодії з a_IIbb₃ інтегрином. Роль однієї з цих амінокислот, Lys³⁸⁰, було підтверджено у дослідах з мутантним фібриногеном Kaiserslautern. Показано, що крім інтегрину a_IIbb₃ інший інтегрин, експресований на зовнішній мембрані тромбоцитів, a₅b₁, також взаємодіє з Р3 послідовністю у фібриногені.

В результаті роботи встановлено структуру сайту у gС-домені фібриногену для a_IIbb₃ і показано, що цей сайт є комплексним і складається з С-термінальної частини g408-411 (AGDV) та g370-383 (Р3).

1. У роботі був локалізований новий сайт у gC-домені фібриногену g370-383 (Р3) для зв’язування з тромбоцитарними інтегринами a_IIbb₃ та a₅b₁. Показано, що взаємодія Р3 сайту з інтегринами відбувається під час ретракції фібринового згустка та адгезії тромбоцитів до фібриногену.

2. За допомогою пептидних бібліотек у Р3 пептиді ідентифіковані чотири амінокислоти, Lys³⁷³, Arg³⁷⁵, Lys³⁸⁰, Lys³⁸¹, які відповідають за зв’язування з інтегрином a_IIbb₃.

3. При використанні мутантних рекомбінантних gС-доменів було показано, що мутації критичних амінокислот Lys³⁷³, Arg³⁷⁵, Lys³⁸⁰, Lys³⁸¹ призводять до зменшення здатності gС-домену підтримувати адгезію тромбоцитів.

4. Одночасна делеція С-термінальної частини g408-411 (AGDV) та мутація чотирьох амінокислот Lys³⁷³, Arg³⁷⁵, Lys³⁸⁰, Lys³⁸¹ призводять до повної втрати функції gС-доменом підтримувати адгезію тромбоцитів. Сайт для зв’язування a_IIbb₃ у gС домені фібриногену є комплексним і складається з С-термінальної частини g408-411 (AGDV) та сайту g370-383 (Р3).

5. _{Фібриноген Kaiserslautern, з мутацією у Р3 послідовності (амінокислота Lys}³⁸⁰ _{замінена на Asn) має уповільнену ретракцію фібринового згустка та зменшену здатність підтримувати адгезію тромбоцитів порівняно з нормальним фібриногеном.}

6. Взаємодія g370-383 з інтегрином a₅b₁ свідчить про нову специфічність цього інтегрину. Зв’язування інтегрину a₅b₁ з Р3 сайтом показано не тільки на тромбоцитах, але й на клітинах з ядром.

Публікації автора:

1. Podolnikova N.P., Yakubenko V.P., Volkov G.L., Plow E.F., Ugarova T.P. Identification of a Novel Binding Site for Platelet Integrins a_IIbb₃ (GPIIbIIIa) and a₅b₁ in the gC-domain of Fibrinogen // Journal of Biological Chemistry. – 2003. – vol. 278, №34. – P. 32251-32258.

2. Ugarova, T. P., Lishko, V. K., Podolnikova, N. P., Okumura, N., Merkulov, S., Yakubenko, V. P., Yee, V. C., Lord, S. T., and Haas, T. A. Sequence 377-395 (P2), but not g190-202(P1), is the Binding Site for the a_MI-domain of Integrin a_Mb₂ in the gC-domain of Fibrinogen // Biochemistry.- 2003.- № 42. – P. 9365-9373.

3. Подольнікова Н.П., Волков Г.Л., Угарова Т.П. Структурно-функціональний аналіз пептиду Р3, що ідентичний до g370-383, ділянки зв’язування фібриногену з інтегрином a_IIbb₃ // Укр. біохім. журн. – 2003.- № 6.- С. 99-105.