Анотація до роботи:

Тарасов О.А. Культуральні, молекулярно-біологічні та антигенні властивості вакцинних штамів Erysipelothrix rhusiopathiae – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наук за спеціальністю 16.00.03 – ветеринарна мікробіологія та вірусологія. – Національний аграрний університет, Київ, 2008.

На підставі проведених культурально-біохімічних, мікробіологічних, серологічних і молекулярно-біологічних досліджень підібрано та охарактеризовано штам Erysipelothrix rhusiopathiae М-2 ВК для виготовлення інактивованої вакцини проти бешихи свиней, оптимізовано склад живильного середовища та термін культивування з метою отримання максимальної біомаси бактерій. Запропоновано метод та режим інактивування бактерій бешихи, експериментально обґрунтовано застосування для виробництва вакцини ад’юванта “Montanide ISA 25”. Імуногенність штаму Erysipelothrix rhusiopathiae М-2 ВК, що мав інсерцію в гені spaA, підтверджено в дослідах на лабораторних тваринах і свинях.

Встановлено, що 11 штамів збудника бешихи свиней різних серотипів (1, 2а, 2в, N та нетиповані ізоляти) не відрізнялись між собою за біохімічними і культурально-морфологічними ознаками та мали однаковий розмір гена spaA – 1880 нуклеотидних пар.

Уперше встановлено інсерцію в гені spaA у ДНК Erysipelothrix rhusiopathiae штаму М-2 ВК завбільшки 400 нуклеотидних пар.

Експериментально підтверджено високу протективну активність штаму Erysipelothrix rhusiopathiae М-2 ВК у дослідах на мишах та свинях. Експериментальна емульсин-вакцина через 14 діб після підшкірного введення в дозі 2 10⁹ м.к. забезпечувала захист 92 % щеплених мишей та 75 % піддослідних свиней через шість місяців після одноразового внутрішньом’язового щеплення в дозі 8 10⁹ інактивованих бактерій бешихи.

1. У дисертації наведене теоретичне узагальнення і нове вирішення наукової проблеми, що виявляється в проведених культурально-біохімічних, мікробіологічних, серологічних і молекулярно-біологічних дослідженнях, визначенні протективних властивостей підібраного та охарактеризованого штаму E. rhusiopathiae М-2 ВК для виготовлення інактивованої вакцини проти бешихи свиней, оптимізуванні складу живильного середовища та терміну культивування з метою отримання максимальної біомаси бактерій. Запропоновано метод та режим інактивування бактерій бешихи, експериментально обґрунтовано застосування для виробництва вакцини ад’юванта “Montanide ISA 25”. Імуногенність штаму E. rhusiopathiae М-2 ВК, що мав інсерцію в гені spaA, підтверджено в дослідах на лабораторних тваринах і свинях.

2. Встановлено, що 11 штамів збудника бешихи свиней різних серотипів (1, 2а, 2в, N та нетиповані ізоляти) не відрізнялись між собою за ферментативними та культурально-морфологічними ознаками та мали однаковий розмір гена spaA – 1880 нуклеотидних пар.

3. Уперше встановлено інсерцію в гені spaA ДНК E. rhusiopathiae М-2 ВК розміром 400 нуклеотидних пар.

4. Підтверджено, що штам E. rhusiopathiae М-2 ВК, поряд зі штамом 1933, в імуноферментному аналізі вирізнявся найвищою антигенною активністю відносно гіперімунних сироваток крові, отриманих на антигени бактерій бешихи штамів ВР-2 вар. ІВМ, 149, Ш та М-2 ВК.

5. Доведено, що вирощування бактерій вакцинного штаму М-2 ВК на модифікованому нами середовищі Фейста при температурі (36,7±0,3) С протягом 24 годин забезпечувало найбільше накопичення біомаси бактерій бешихи в культуральній рідині – 9,02±0,04 10⁹ КУО/см³ при оптимальному значенні рН (6,65±0,04) наприкінці культивування.

6. Встановлено, що повне інактивування бактерій бешихи із збереженням антигенних властивостей та структури клітин відбувається при додаванні формаліну (із вмістом формальдегіду не менше 37 %) в кількості 0,3 % та витримуванні за температури (19±1)С протягом 96 годин.

7. У порівняльних дослідженнях з ад’ювантами на основі сумішей марколу з ланоліном, вазелінової олії з ланоліном та Montanide ISA 25 встановлено, що Montanide ISA 25 забезпечував утворення найбільш стійкої емульсії, яка мала консистенцію, придатну для введення тваринам без попереднього прогрівання.

8. Експериментально підтверджено достатню протективну активність антигену E. rhusiopathiae штаму М-2 ВК у дослідах на мишах та свинях. Експериментальна емульсин-вакцина, виготовлена нами на основі інактивованого антигену E. rhusiopathiae штаму М-2 ВК, через 14 діб після підшкірного введення в дозі 210⁹ м.к. забезпечувала захист 92 % щеплених мишей від зараження патогенними бактеріями штаму E. rhusiopathiae 149 в дозі 100 LD₅₀ та 75 % піддослідних свиней через шість місяців після одноразового внутрішньом’язового щеплення в дозі 810⁹ м.к. від внутрішньошкірного зараження бактеріями контрольного штаму К збудника бешихи свиней в дозі 310⁶ м.к.

Публікації автора:

1. Визначення оптимальної заражаючої дози збудника бешихи контрольного штаму, що викликає зараження свиней / В.Ф. Павлов, А.Ф. Ображей, М.Г. Остапець, О.А. Тарасов // Ветеринарна медицина України. – 2000. – № 8. – С. 26–27 (здобувач брав участь в проведенні дослідів, аналізі і узагальненні результатів).

2. Тарасов О.А., Ображей А.Ф., Сапейко В.П. Чутливість польових та музейних штамів збудника бешихи свиней до антибіотичних речовин // Ветеринарна біотехнологія. – 2004. – № 5. – С. 140–143 (здобувач провів експериментальні дослідження, зроблено висновки, підготовлено статтю до друку).

3. Дослідження імуногенності емульсин-вакцин проти бешихи свиней на лабораторних тваринах / О.А. Тарасов, А.Ф. Ображей, М.Г. Остапець, В.Ф. Бабак, А.М. Головко, В.Г. Скрипник, Н.Г. Пінчук // _{Ветеринарна медицина: Міжвід. темат. наук. зб. –} Харків, 2005. – Т. 2, № 85. – С. 1063–1066 (здобувач провів виготов-лення експериментальних варіантів вакцин та дослідження на лабораторних тваринах з визначення протективного ефекту).

4. Тарасов О.А. Дослідження імуногенності експериментальних інактивованих моноштамних емульсин-вакцин проти бешихи свиней в дослідах на лабораторних тваринах// Ветеринарна біотехнологія. – 2005. – №6. – С. 197–204.

5. Деклараційний патент України на корисну модель 10833 Україна, МПК С12N1/20, А61К39/02. Штам бактерій Erysipelothrix rhusiopathiae М-2ВК для виготовлення інактивованої вакцини проти бешихи свиней / О.А. Тарасов, А.Ф. Ображей, О.М. Дерябін (Україна)/ Інститут ветеринарної медицини УААН – № u200507495; Заявл. 27.07.2005; Опубл. 15.11.2005, бюл. №11. – 4 с. (здобувач провів експериментальні дослідження та оформив заявку на патент).

6. Деклараційний патент України на корисну модель 10834. Україна, МПК G01N33/00. Спосіб виявлення бактерій роду Erysipelothrix виду Erysipelothrix rhusiopathiae у біоптатах або патологічному матеріалі, або кормах, або об’єктах зовнішнього середовища/ О.А. Тарасов, А.Ф. Ображей, О.М. Дерябін, Д.М. Іродов, О.Г. Дерябіна (Україна) / Інститут ветеринарної медицини УААН – № u200507497; Заявл. 27.07.2005; Опубл. 15.11.2005, бюл. № 11. – 2 с. (здобувач провів експери-ментальні дослідження та оформив заявку на патент).

7. Методичні рекомендації з діагностики бешихи свиней методом полімеразної ланцюгової реакції / А.Ф. Ображей, О.А. Тарасов, О.М. Дерябін, О.Г. Дерябіна. – Київ, 2005 – 15 с. (здобувач брав участь у проведенні дослідів, оформленні протоколів).

8. Біопрепарат „Емульсин-вакцина проти бешихи свиней інактивована”: ТУУ 24.4 – 05510830-059: 2006. – Чинний від 13.10.2006. – Київ, 2006. – 17 с. (здобувач брав участь у проведенні експериментальних досліджень та оформленні нормативної документації).

9. Тест система „Бешиха – ПЛР тест” для виявлення ДНК Erysipelothrix rhusiopathiae методом полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР). ТУ У 24.2 – 05510830 – 067: 2006. – Чинний від 13.10.2006. – Київ, 2006. – 22 с. (здобувач брав участь у проведенні експериментальних досліджень та оформленні нормативної документації).

10. Вивчення нешкідливості та протективності інактивованої емульсин вакцини проти бешихи свиней / А.Ф. Ображей, О.А. Тарасов, І.І. Матяж //Ветеринарна медицина України. – 2007. – № 2. – С. 39–42 (здобувач брав участь у плануванні дослідів, проводив щеплення та контрольне зараження дослідних тварин, обробку результатів дослідів).

11. Аналіз поліморфізму гена білка spa A Erysipelothrix rhusiopathiae / А.Ф. Ображей, О.М. Дерябін, О.А. Тарасов, О.Г. Дерябіна // _{Ветеринарна медицина: Міжвід. темат. наук. зб. –} Харків, 2007. – № 88. – С. 161–165 (здобувач дослідив молекулярно-біологічні властивості штамів бактерій бешихи щодо гена spa A в ПЛР ).

12. Вивчення антигенних властивостей Erysipelothrix rhusiopathiae різних штамів/ А.Ф. Ображей, О.А. Тарасов, О.М. Дерябін // Наук. вісник ЛНАВМ імені С.З.Гжицького, Львів, 2007. – Т. 9, № 1 (32). – С. 114–119 (здобувач провів експериментальні дослідження).

13. Тарасов О.А. Порівняльна оцінка живильних середовищ для культивування Erysipelothrix rhusiopathiae // Наук. вісник ЛНАВМ імені С.З. Гжицького. – Львів, 2007. – Т. 9, № 3 (34). – С. 192–198.