Анотація до роботи:

Преподобна К.В. Механізми реакцій метаболізму та елімінації гідазепаму в організмі щурів. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 14.03.05 – фармакологія – Одеський державний медичний університет МОЗ України, Одеса 2008.

Дисертація присвячена вивченню екскреції та метаболізму, гідазепаму з організму тварин, дослідженню процесів N¹-деалкілювання та С³-гідроксилювання його молекули.

Сполученням методів тонкошарової хроматографії та мас-спектрометрії встановлено будову гідазепаму та його метаболітів. У дослідах in vitro спостерігається інтенсивний метаболізм гідазепаму з утворенням його головних метаболітів – дезалкілгідазепаму, дезалгідроксигідазепаму та ацетилгідразину. За своїми фізико-хімічними властивостями ці речовини можна розділити на гідрофільні (ацетилгідразин) та ліпофільні (гідазепам, дезалкілгідазепам та дезалкілгідроксигідазепам). Співвідношення гідрофільних та ліпофільних метаболітів у екскретах тварин склало 6:1 відповідно.

Визначенно ізоформи CYP450 стандартними методами інгібіторного аналізу, що каталізують процеси N¹-деалкілювання та С³-гідроксилювання по фармакокінетичним показникам. У всіх дослідженнях відмічено, що початкова концентрація препарату або його метаболітів у незначній мірі залежить від змін кліренсу. В той же час зміни кліренсу зменшують показник періоду напівелімінації засобу. Отриманні результати дають змогу прогнозувати дію гідазепаму з різними лікарськими засобами – інгібіторами, індукторами та субстратами CYP450.

В дисертації наведено теоретичне обґрунтування та експериментальне вивчення механізмів реакцій метаболізму та елімінації гідазепаму в організмі щурів. Теоретично обґрунтовано та експериментально доведено вирішальну роль метаболітів гідазепаму в реалізації ними фармакодинамічної дії препарату. Досліджено процес N¹-деалкілювання гідазепаму при введенні в організм індукторів та інгібіторів ферментної системи, що каталізує процес окислення молекули гідазепаму.

1. Синтезовано гідазепам та його мічені радіоактивним ізотопом аналоги, що у гідразидному та у гетерокільці містять ¹⁴С. Питома радіоактивність одержаних зразків дорівнювала для гідазепаму 0,07 Ки/моль, для диметилгідазепаму – 0,003 Ки/моль. Сполуки мають високу чистоту, що дає змогу використовувати їх у фармакокінетичних дослідженнях.

2. Оптимізована система методів тонкошарової хроматографії та мас-спектрометрії при встановленні структури метаболітів та визначені шляхи метаболізму гідазепаму. Методами радіохроматографії розділені ліпофільні метаболіти гідазепаму, та при мас-спектрометрії встановлена їх будова (N¹-деалкільне похідне та його 3-гідроксильний метаболіт). Гідрофільні метаболіти представлені в екскретах щурів ацетилгідазепамом.

3. Валідовано аналітичні методи кількісного радіохімічного визначення вихідних сполук та їх метаболітів. Визначено стабільність речовини у біоматеріалі, чистота препарату її специфічність та точність методів.

4. Проведено інгібіторний аналіз процесів окислення гідразидного фрагменту та гетерокільця молекули гідазепаму, й визначено відповідні ізоформи цитохрому Р-450, які каталізують ці реакції. Встановлено основний шлях елімінації гідазепаму – екскреція з калом 73 %, а з сечею 11 %. Введення індуктору фенобарбіталу призвело до зменшення періоду напівелімінації (t_1/2) у екскретах, що пов’язане із збільшенням концентрації CYP450 в організмі. Сумісне застосування інгібітору CYP450 кетоконазолу з гідазепамом, виявило зменшення показників у зразках.

5. Обґрунтована кінетична схема та визначена кількісна оцінка елімінації препарату. За результатами експериментів встановлено, що фармакокінетичні параметри гідазепаму (t_1/2, Cl, AUС, k_el та MRT) змінюються в залежності від типу індуктору (фенобарбітал) чи інгібітору (кетоконазол) CYP450, що вводилися безпосередньо до прийому гідазепаму.

6. Проведено аналіз фармакометаболічного профілю гідазепаму та його метаболітів, визначено протисудомну активність по коразоловому тесту (ED₅₀ 0,36 мг/кг) та протиепілептичну активність засобів при аплікації судомних реагентів на кору головного мозку й розрахована гостра токсичність (LD₅₀ 1700 мг/кг) для препаратів, що досліджувались.

Публікації автора:

1. Преподобна К.В. Біофармацевтичні підходи до раціонального використання препаратів бенздіазепінового ряду / М.Я. Головенко, І.Ю. Борисюк, К.В. Преподобна. // Одеський медичний журнал. – 2006. - № 6 (98). – С. 4–7. Внесок дисертанта – участь в експерименті, підготовка матеріалу до друку.

2. Преподобна К.В. Синтез ¹⁴С-гідазепаму та його потенційних метаболітів / М.Я. Головенко, В.І. Павловський, К.В. Преподобна, В.Б. Ларіонов, К.О. Семенішина. // Ukrainica Bioorganica Acta. – 2007. - № 1. – С. 20–23. Внесок дисертанта – проведення есксперимету, написання та оформлення статті.

3. Преподобна К.В. Метаболізм гідазепаму в організмі щурів / М.Я. Головенко, К.В. Преподобна, О.В. Мазепа, Н.В. Шнейдер. // Клінічна фармація. – 2007. – Т. 11, № 3. – С. 6–10. Внесок дисертанта – постановка завдань дослідження, проведення експерименту, підготовка матеріалу до друку.

4. Преподобная Е.В. Фармако-токсикологическая характеристика гидазепама и его метаболитов / Головенко Н.Я., Преподобная Е.В. // Современные проблемы токсикологии.– 2007. – № 4. – С. 39–41. Внесок дисертанта – розробка методології експерименту проведення дослідженнь, аналізу та узагальнення даних, написання статті.

5. Преподобна К.В. Кінетика елімінації гідазепаму в умовах взаємодії з індукторами та інгібіторами цитохрому Р-450 (CYP3A4, CYP2C19) / Преподобна К.В. // Досягнення біології та медицини. – 2008. - № 1 (11). – С. 16–19.

6. Преподобна К.В. Протисудомна активність гідазепаму та його метаболітів за умов осередкової епілепсії. / Преподобна К.В. // Вісник Вінницького національного медичного університету. — 2007. — № 11 (2/1). — С. 524-526 (Актуальні проблеми фармакології : наук.-практ. конф. з міжнар. участю, присвячена 70-річчю кафедри фармакології Вінницького національного медичного університету ім. М. І. Пирогова. Вінниця, 28-29 верес. 2007 р. : праці.).

7. Преподобна К.В. Фармакокінетична взаємодія гідазепаму з індукторами та інгібіторами. / Преподобна К.В. // X конференції молодих учених та студентів-хіміків південного регіону України, 11-13 вересня 2007 р. : тези доп. – Одеса, 2007. – С. 47.

8. Преподобная Е.В. Баланс масс гидазепама в фармакокинетических исследованиях. / Головенко Н.Я., Преподобная Е.В. // Психофармакология и биол. наркология. — 2007. — Т. 7, спец. вып. (сентябрь). Ч. 2 (Л-Я). — С. 2-1660. (Фармакология — практическому здравоохранению: III съезд фармакологов России. Санкт-Петербург, 23-27 сент. 2007 г.). Внесок дисертанта — проведення експериментів, аналізу результатів, написання та оформлення тез.

9. Преподобна К.В. Валідація аналітичного методу визначення ¹⁴С-гідазепаму у біологічному матеріалі. / Преподобна К.В., Шнейдер Н.В. // IX конференції молодих учених та студентів-хіміків південного регіону України, 16-17 жовтня 2006 р. : тези доп. – Одеса, 2006. – С. 60. Внесок дисертанта — проведення експериментів, статобробки, аналізу результатів, написання та оформлення тез.

10. Преподобна К.В. Синтез гідазепаму, вміщуючего ¹⁴С у гідразидному фрагменті молекули. / Семенішина К.О., Преподобна К.В. // IX конференції молодих учених та студентів-хіміків південного регіону України, 16-17 жовтня 2006 р. : тези доп. – Одеса, 2006. – С. 61. Внесок дисертанта — проведення експериментів, аналізу результатів, написання та оформлення тез.

11. Преподобна К.В. Залежність динаміки протисудомного ефекту ¹⁴С-гідазепаму від його концентрації в крові експериментальних тварин / Майкова Г.В., Преподобна Е.В. // Фармакологія-2006 — крок в майбутнє : III Нац. з’їзд фармакологів України, 17-20 жовт. 2006 р. : тези доп. — Одеса, 2006. — С. 104. Внесок дисертанта — проведення експериментів, статобробки, аналізу результатів, написання та оформлення тез.

12. Преподобна К.В. Протисудомна активність гідазепаму за осередкової епілепсії у щурів. / Преподобна Е.В., Майкова Г.В. // Фармакологія-2006 — крок в майбутнє : III Нац. з’їзд фармакологів України, 17-20 жовт. 2006 р. : тези доп. — Одеса, 2006. — С. 140. Внесок дисертанта — проведення експериментів, аналізу результатів, написання та оформлення тез.

13. Преподобна К.В. Протисудомна активність гідазепаму та його метаболітів за умов осередкової епілепсії. / Преподобна К.В. // Вісник Вінницького національного медичного університету. — 2007. — № 12 (1). — С. 219 (Актуальні проблеми фармакології : наук.-практ. конф. з міжнар. участю, присвячена 70-річчю кафедри фармакології Вінницького національного медичного університету ім. М. І. Пирогова. Вінниця, 15-18 березня. 2008 р. : праці.). Внесок дисертанта — проведення досліджень, статистичної обробки, аналізу результатів, написання та оформлення тез.