У роботі отримані нові дані відносно змін у функціонуванні регуляторної системи трансформуючого фактора росту 1, що мають місце у клітинах лінії А549 аденокарциноми легені людини під впливом протипухлинних препаратів (цисплатин, доксорубіцин, метотрексат). Показано, що у пухлинних клітинах, які вижили після дії сублетальних доз цих протипухлинних препаратів, відбувається зниження продукції ТФР та функціональної активності його внутрішньоклітинної ефекторної системи. 1. У клітинах лінії А549 під впливом протипухлинних препаратів цисплатину, доксорубіцину чи метотрексату індукується апоптоз, що виявляється у фрагментації ядерної ДНК. 2. Обробка клітин лінії А549 цисплатином чи доксорубіцином веде до зростання рівня експресії проапоптичного білка р53 відповідно у 7,7 раз та 6,5 раз, порівняно контролем. 3. Доксорубіцин та цисплатин пригнічують відповідно у 1,5 та 5,5 раз продукцію ТФР1 на рівні білка у клітинах лінії А549, тоді як рівень експресії мРНК даного цитокіну при цьому суттєво не змінюється. Експресія мРНК ТФР2 у клітинах лінії А549 не змінюється під впливом доксорубіцину, але інгібується метотрексатом і цисплатином у 1,45 та 1,35 раз, відповідно. 4. Експресія мРНК рецептора ІІ типу ТФР у клітинах лінії А549 інгібується цисплатином у 6,6 раз та доксорубіцином у 2 рази, але не змінюється під дією метотрексату. Рівень експресії мРНК рецептора І типу ТФР під впливом досліджуваних протипухлинних препаратів залишається на рівні, характерному для інтактних клітин. 5. Клітини лінії А549, оброблені цисплатином, доксорубіцином чи метотрексатом, характеризуються змінами у рівні експресії компонентів сигнального шляху ТФРb порівняно з інтактними клітинами цієї лінії. Виявлено зниження рівня експресії білків Smad2, Smad3 та Smad4, які є позитивними регуляторами у сигнальному шляху ТФРb, та показано підвищення рівня експресії Smad7 білка, що є інгібітором передачі регуляторного сигналу ТФРb. 6. Під дією цисплатину, доксорубіцину та метотрексату в клітинах лінії А549 має місце зниження експресії рівня Smad1 білка, залученого у сигнальний шлях фактора дозрівання кісток. 7. Діючи на клітини лінії А549, доксорубіцин пригнічує ТФР1-залежне фосфорилювання білків Smad2 та Smad3. У той же час цей препарат не викликає у цих клітинах змін в експресії протеїнкінази Erk2 та фосфорилюванні протеїнкіназ Erk1 та Erk2, що свідчить про специфічність дії доксорубіцину саме на регуляторну систему ТФР1. 8. Доксорубіцин пригнічує ТФР1-індуковану активацію Smad-залежного CAGA-промотору у клітинах лінії А549 карциноми легені людини та у клітинах лінії НТ1080 фібросаркоми людини. Інгібувальна дія доксорубіцину на активацію Smad-залежного CAGA-промотору виявляється вже на першу годину інкубації клітин у присутності цього препарату. Цисплатин та метотрексат суттєво не впливають на активацію даного промотору в клітинах ліній А549 та НТ1080. Основні публікації за темою дисертації 1. Вплив протипухлинних препаратів на експресію мРНК рецепторів трансформуючого фактора росту у клітинах лінії А549 карциноми легені людини / Федоренко О. В., Філяк О. С., Філяк Є. З., Стойка Р. С. // Клінічна та експериментальна патологія. – 2004. – Т. 3, № 4. – С. 77 - 79. (Дисертанту належить підготовка зразків для дослідів, пошук та аналіз даних літератури, участь в аналізі результатів та написання статті). 2. Філяк Є., Філяк О., Стойка Р. Вплив протипухлинних препаратів на експресію компонентів сигнального шляху трансформувального фактора росту у клітинах лінії А549 карциноми легень людини // Вісник Львів. університету. Серія біологічна. – 2004. – Вип. 35. – С. 60 - 65. (Дисертанту належить підготовка зразків для досліду та проведення їх Western-blot аналізу, участь в аналізі результатів). 3. Вплив протипухлинних препаратів на експресію ТФР клітинами лінії А549 карциноми легені людини / Філяк О., Федоренко О., Філяк Є., Стойка Р. // Біологія тварин. – 2004. – Т. 6, № 1 - 2. – С. 231 - 237. (Дисертанту належить визначення цитотоксичного та цитостатичного ефектів протипухлинних препаратів на досліджувані клітини, виділення апоптичної ДНК та її електрофорез у гелі агарози, визначення продукції ТФР клітинами лінії А549 методом біотестування, підготовка зразків для роботи з мРНК ТФР, пошук та аналіз даних літератури, участь в аналізі результатів та написання статті). 4. Філяк О., Філяк Є., Стойка Р. Часова залежність фосфорилювання білка Smad2 сигнального шляху ТФРb1 під дією доксорубіцину у клітинах лінії А549 карциноми легені людини // Експериментальна та клінічна фізіологія та біохімія. – 2005. - № 1. – С. 47 - 50. (Дисертанту належить підготовка зразків для досліду та проведення їх Western-blot аналізу, пошук та аналіз даних літератури, участь в аналізі результатів та написання статті). 5. Філяк О., Філяк Є., Стойка Р. Вплив доксорубіцину на фосфорилювання білка Smad3, задіяного у сигнальному шляху ТФР-b у клітинах лінії А549 аденокарциноми легені людини // Медична хімія. – 2005. - № 1. – С. 63 - 67. (Дисертанту належить підготовка зразків для досліду та проведення їх Western-blot аналізу, пошук та аналіз даних літератури, участь в аналізі результатів та написання статті). 6. Filyak O., Stoika R. Comparative study of p53 expression in human carcinoma cell lines A549 and MCF7 under anticancer drug treatment // Український біохімічний журнал. – 2005. – Т. 77, № 2. – С. 136 - 140. (Дисертанту належить отримання результатів досліджень, підготовка матеріалів до друку, участь в аналізі результатів та написання статті). 7. Вплив протипухлинних препаратів на здатність трансформуючого фактора росту активувати Smad-залежний CAGA-промотор у ракових клітинах / Філяк Є., Філяк О., Сушельницький С., Стойка Р. // Доп. НАН України. – 2005. - № 7. – С. 172 - 177. (Дисертанту належить підготовка зразків для дослідів, пошук та аналіз даних літератури, участь в аналізі результатів та написання статті). 8. Osmak (Filyak) O., Filyak Ye., Boyko M. Effect of anticancer drug treatment on TGF signaling pathway in A549 human lung carcinoma cells // Abstr. Conference for young scientists, PhD students and students on molecular biology and genetics. – Kyiv. – September 25-27, 2003. – P. 251. (Дисертант брала участь у проведенні досліджень, статистичній обробці результатів, аналізі експериментальних даних, написанні та оформленні тез). 9. Filyak O. S., Filyak Ye. Z., Stoika R. S. Effect of anticancer drugs on transforming growth factor signaling in A549 human lung carcinoma cells // Abstr. First (Inaugural) Ukrainian Congress for Cell Biology. – Lviv. – April 25 - 28, 2004. – P. 31. (Дисертант брала участь у проведенні досліджень, статистичній обробці результатів, аналізі експериментальних даних, написанні та оформленні тез). 10. Transforming growth factor beta in cell response to stressing actions / Stoika R. S., Yakymovych I. A., Yakymovych M. Ya., Korchynsky O. G., Filyak Ye. Z., Filyak O. S., Chorna I. V. // Abstr. First (Inaugural) Ukrainian Congress for Cell Biology. – Lviv. – April 25 - 28, 2004. – P. 340. (Дисертант брала участь у проведенні досліджень, статистичній обробці результатів, аналізі експериментальних даних). 11. Transforming growth factor 1 (TGF1) enhances proapoptotic action of DNA-damaging agents although these agents inhibit Smad-dependent TGF-signaling / Filyak Ye., Filyak O., Fedorenko O., Souchelnytskyi S., Stoika R. // Український біохімічний журнал (Спеціальний випуск). – 2005. – Т. 77, № 2. – Р. 107. (Дисертант брала участь у проведенні досліджень, статистичній обробці даних та аналізі експериментальних даних). |
