Анотація до роботи:

Антоненко К.О. Місце й значення полімеразно-ланцюгової реакції у визначенні резистентності збудника туберкульозу до фармакологічних засобів. - Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 14.03.05 – фармакологія. – Одеський державний медичний університет МОЗ України.- Одеса, 2009.

В роботі проведено дослідження показників резистентності M.tuberculosis до протитуберкульозних препаратів в Одеському регіоні, а також можливостей методу полімеразно-ланцюгової реакції (ПЛР) для визначення та відстеження резистентних штамів збудника туберкульозу. Показано, що в 2006 р. серед протитуберкульозних препаратів І і ІІ рядів медикаментозна резистентність була найменшою для піразинаміду і офлоксацину, а найбільшою – для рифампіцину і пефлоксацину. Метод мультиплексної алель-специфічної ПЛР виявив найбільшу специфічність при визначенні мутацій в гені rpoB і найбільшу чутливість при визначенні мутації в гені katG, що відповідали за резистентність до рифампіцину та ізоніазиду. Присутність мутацій в генах katG і rpoB частіше спостерігалась у хворих після перебування в місцях позбавлення волі або підчас повторного лікування. Також наявність цих мутацій супроводжувалась меншою ефективністю лікування туберкульозу. За результатами визначення 6- ти локусів високий рівень мутацій в генах katG і rpoB відзначався серед низки кластерів і груп M.tuberculosis. Отримані дані підтвердили важливість моніторингу медикаментозної резистентності збудника туберкульозу, засвідчили можливості і значення ПЛР-методу для визначення та ідентифікації резистентних штамів M.tuberculosis.

У дисертації наведено нове вирішення актуальної проблеми фармакології – підвищення ефективності фармакотерапії хворих на туберкульоз, яке полягає в обґрунтуванні застосування полімеразно-ланцюгової реакції для відстеження поширеності медикаментозно-резистентних штамів збудника туберкульозу. Обґрунтовано та впроваджено експрес-метод визначення мутацій в генотипі збудника туберкульозу як маркер медикаментозної резистентності та прогностичний критерій ефективності лікування туберкульозу.

1. В Одеському регіоні в 2006 р. найнижчий рівень первинної резистентності до протитуберкульозних препаратів І ряду був у піразинаміду - 22,2 %, а найвищим – у стрептоміцину і рифампіцину – 59,3 і 61,1 % відповідно; мультирезистентність виявлялась у 22,2 %. Найнижчий рівень вторинної резистентності до препаратів І ряду був зареєстрований також у піразинаміду - 42,9 %, а найвищий - у рифампіцину – 80,6 %; мультирезистентність складала 64,1 %. Рівень первинної резистентності до протитуберкульозних препаратів ІІ ряду був найвищим у пефлоксацину, етіонаміду і амікацину і перебував у діапазоні 66,7-76,5 %. Найнижчими показники первинної резистентності були у канаміцину, ПАСК, ломефлоксацину, левофлоксацину і офлоксацину – від 0 до 9,8 %, що підтверджує резервну роль цих фармакологічних препаратів.

2. Метод мультиплексної алель-специфічної ПЛР, що застосовувався, виявив найбільшу специфічність при визначенні мутації в гені rpoB, що досягала 93,8 %, і найбільшу чутливість при визначенні мутації в гені katG, що дорівнювала 87,5 %. Одержані результати підтверджують можливість застосування цього методу для експрес-діагностики медикаментозної резистентності збудника туберкульозу до ізоніазиду і рифампіцину. Поширеність мутацій в генах katG, rpoB, і embB, що асоціюються з резистентністю M.tuberculosis до ізоніазиду, рифампіцину та етамбутолу, в Одеському регіоні складала 54,2, 44,9 і 15,0 % відповідно.

3. Мутації в генах katG і rpoB, що обумовлюють резистентність збудника туберкульозу до ізоніазиду і рифампіцину, спостерігались частіше у хворих, які раніше перебували в місцях позбавлення волі, або раніше вже отримували протитуберкульозну терапію, що свідчить про значне поширення медикаментозно-резистентних штамів в пеніцитарних закладах та розвиток резистентності під час протитуберкульозної терапії. Наявність цих мутацій асоціювалась з меншою ефективністю протитуберкульозної хіміотерапії, що клінічно проявлялось у гальмуванні процесів розсмоктування і рубцювання осередків у легенях, збереженні бактеріовиділення. Обґрунтовано доцільність та доведено важливість визначення мутацій в генах katG і rpoB як прогностичного критерію успішності лікування туберкульозу.

4. Генотипування збудника туберкульозу за 6-ма локусами виявило високу дискретну здатність цього методу. Було виявлено штами родини Beijing, а також штами з груп LAM, URAL, що відрізнялись високим рівнем медикаментозної резистентності. Було проведено генотипування штамів збудника туберкульозу з дуже високим рівнем резистентності до ізоніазиду і рифампіцину, носії яких мали попередній туберкульозний контакт, тобто ці ізоляти мали особливе значення у поширенні медикаментозно резистентних штамів збудника туберкульозу серед населення Одеського регіону.

5. За результатами визначення локусів MIRU10-MIRU26-MIRU31-MIRU39-MIRU40-ETR A серед ізолятів родини Beijing і групи non-Beijing були виявлені кластери, що мали високий рівень мутацій генів katG і rpoB, які обумовлювали резистентність до ізоніазиду та рифампіцину відповідно. Зокрема, обидві мутації були присутні у кластерів 375344, 385334, 712234.

6. Отримані результати підтвердили актуальність постійного моніторингу рівня медикаментозної резистентності збудника туберкульозу, що дозволить покращити ефективність застосування протитуберкульозних препаратів.

Публікації автора:

1. Антоненко К. О. Поширеність медикаментозної резистентності у збудника туберкульозу та інформативність її генотипичного визначення / В. Й. Кресюн, К. О. Антоненко, О. К. Лобанов, В. А. Штанько // Досягнення біології та медицини. — 2007. — № 2. — С. 74-80. Внесок дисертанта — провела аналіз джерел літератури, експерименти, статистичну обробку, аналіз і узагальнення результатів, написала та оформила роботу.

2. Антоненко К. О. Визначення та поширеність мутацій, що пов’язані з медикаментозною резистентністю, в генотипі збудника туберкульозу / К. О. Антоненко, В. Й. Кресюн // Вісник проблем біології і медицини. — 2007. — Вип.4 — С. 124-132. Внесок дисертанта — розробка методології експерименту, огляд літератури, проведення досліджень, аналізу та узагальнення результатів, написання статті.

3. Антоненко К. О. Рівень резистентності збудника туберкульозу до рифампіцину і можливість її генотипічного визначення / К. О. Антоненко // Одеський медичний журнал. – 2008. — № 1 (105). – С. 24-28.

4. Антоненко К. О. Вивчення резистентності збудника туберкульозу до протитуберкульозних препаратів І-ІІ ряду / В. Й. Кресюн, К. О. Антоненко // Клінічна фармація. – 2008. - № 3. - С. 19-24. Внесок дисертанта — розробка методології експерименту, проведення аналізу джерел літератури, досліджень, статистична обробка результатів, їх аналіз, написання та
оформлення статті.

5. Антоненко К. О. Інформативність генотипування збудника туберкульозу / В. Й. Кресюн, К. О. Антоненко // Одеський медичний журнал. – 2008. - № 5 (109). – С. 26-30. Внесок дисертанта — розробила методологію експерименту, провела огляд літератури, дослідження, аналіз та узагальнення результатів, написала статтю.

6. Пат. 29211 Україна, МПК (2006) А61К 31/00, С12Q 1/68, С12R 1/32 Склад реактивної суміші для діагностики резистентності до ізоніазиду збудника туберкульозу / Антоненко К. О., Кресюн В. Й, Антоненко П. Б. (Україна). ; заявник і патентовласник Одес. держ. мед. ун-т. - № u200708746 ; заявл. 30.07.2007 ; опубл. 10.01.2008, Бюл. №1. – 4 с. Внесок дисертанта — провела аналіз результатів експериментів, написала та оформлила патент.

7. Антоненко Е. А. Современные пути генотипирования возбудителя туберкулеза / Е. А. Антоненко, П. Б. Антоненко // Сучасні досягнення валеології та спортивної медицини : ХII Міжнар. наук.-практ. конф., 5-6 жовт. 2006 р. : матеріали. — Одеса : ОДМУ, 2006. — С. 28. Внесок дисертанта — розробила методологію експерименту, провела дослідження, аналіз та узагальнення результатів, написала тези.

8. Антоненко К. О. Нові можливості діагностики лікарської резистентності збудника туберкульозу / К. О. Антоненко, П. Б. Антоненко, М. М. Чеснокова // “Вчені майбутнього”: науково-практична конф. молодих вчених з міжнародною участю, 25-26 жовт. 2006 р. : тези доп. – Одеса, 2006. – С. 50. Внесок дисертанта — провела аналіз джерел літератури, експерименти, статистичну обробку, аналіз результатів, написала та оформила тези.

9. Антоненко К. О. Медикаментозна резистентність збудника туберкульозу шляхи діагностики / К. О. Антоненко, П. Б. Антоненко // Розвиток наукових досліджень’2006 : друга міжнародна наук.-практ. конф., 27-29 листоп. 2006 р. : матеріали. – Полтава, 2006. – Т. 5. – С. 9-10. Внесок дисертанта — провела аналіз джерел літератури, експерименти, статистичну обробку, аналіз і узагальнення результатів, написала та оформила тези.

10. Antonenko K. O. Detection of isoniazid-resistance mycobacterium tuberculosis / V. I. Kresyun, K. O. Antonenko, P. B. Antonenko // Revista Farmaceuticг a Moldovei: Ediюie specialг. — Conferinюa єtinюificг "Farmacologia Naюionalг la 35 ani" a Societгюii єtiintifice a farmacologilor din Republica Moldova cu participare internaюionalг. — Chiєinгu, 2006. — P.19-20. Внесок дисертанта — збір та аналіз експериментального матеріалу, переклад на англійську мову, оформлення тез до друку.

11. Антоненко К. О. Поширеність медикаментозної резистентності збудника туберкульозу в Одеському регіоні та можливості їх детекції за допомогою полімеразно-ланцюгової реакції / В. Й. Кресюн, К. О. Антоненко, П. Б. Антоненко // Сучасні проблеми епідеміології, мікробіології та гігієни : конференція приурочена до Дня Науки., трав. 2007 р. : матеріали. – Львів, 2007. – С. 197-199. Внесок дисертанта — розробила методологію експерименту, провела експерименти, статистичну обробку, аналіз результатів, написала та оформила тези.

12. Антоненко К. О. Стан медикаментозної резистентності збудника туберкульозу в Одеському регіоні станом на 2006 рік / К. О. Антоненко, П. Б. Антоненко, В. В. Годован // Лікування та реабілітація у загальній практиці-сімейній медицині : Українська респ. наук.-практ. конф., 11-12 трав. 2007 р. : матеріали. – Одеса, 2007. – С. 3-4. Внесок дисертанта — збір та аналіз експериментального матеріалу, оформлення тез до друку.

13. Антоненко Е. А. Определение изониазид-устойчивости возбудителя туберкулёза / В. И. Кресюн, Е. А. Антоненко, В. В. Годован, П. Б. Антоненко // Психофармакология и биол. наркология. — 2007. — Т. 7, спец. вып. (сентябрь). — Ч. 1 (А-Л). — С. 1-1750. (Фармакология — практическому здравоохранению: III съезд фармакологов России. Санкт-Петербург, 23-27 сент. 2007 р. : материалы) Внесок дисертанта — провела експерименти, статистичну обробку, аналіз та узагальнення результатів, написала та оформила тези.

14. Антоненко К. О. Генотипичне визначення медикаментозної резистентності збудника туберкульозу та його інформативність / К. О. Антоненко // Вісник Вінницького національного медичного університету. — 2007. — № 11 (2/2). — С. 756-757 (Актуальні проблеми фармакології: наук.-практ. конф. з міжнар. участю, присвячена 70-річчю кафедри фармакології Вінницького національного медичного університету ім. М. І. Пирогова. Вінниця, 28-29 верес. 2007 р. : тези доп.).

15. Антоненко К. О. Рівень резистентності збудника туберкульозу до рифампіцину та можливість її генотипичного визначення / К. О. Антоненко // “Вчені майбутнього” : наук.-практ. конф. молодих вчених з міжнародною участю., 15-16 жовт. 2007 р. : тези доповідей – Одеса, 2007. – С. 59.

16. Antonenko K. O. Detection of isoniazid-resistant Mycobacterium tuberculosis / P. B. Antonenko, K. O. Antonenko, V. I. Kresyun // The International journal of tuberculosis and lung diseases. – 2007. – Vol. 11, № 11 (suppl. 1). – P. 68-69. (38^th World Conference on Lung Health of the International Union Against Tuberculosis and Lung Disease (The Union). Cape Town, 8-12 November 2007 : abstract presentations.). Внесок дисертанта — збір та аналіз експериментального матеріалу, переклад на англійську мову, оформлення тез до друку.

17. Антоненко К. О. Поширеність резистентності збудника туберкульозу до препаратів другого ряду в Одеському регіоні / К. О. Антоненко // „Молодь – медицині майбутнього : науково-практична конф., 24-25 квіт. 2008 р. : тези доповідей – Одеса, 2008. – С. 125.