Анотація до роботи:

Дьомін Ю.А. Морфофункціональна характеристика кріоконсервованих ембріональних клітин та їхнє використання для лікування хворих із судинною патологією органа зору.- Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня доктора медичних наук за спеціальностями 14.01.35.- кріомедицина та 14.01.18 – офтальмологія - Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України, Харків, 2003.

Дисертаційна робота присвячена вивченню механізмів впливу кріоконсервування та гіпотермічного зберігання на морфофункціональний стан ембріональних клітин різного походження, їхньої взаємодії з організмом експериментальних тварин і людини. Отримано нові дані про корекцію метаболічних порушень в організмі реципієнта під дією кріоконсервованих препаратів, нормалізацію вуглеводного балансу, оксидантно-антиоксидантної системи, а також їхній вплив на стан коагуляційної та фібринолітичної ланок гемостазу, активність лізосомальних ферментів. Уперше запропоновано комплексний препарат “Гемонейронал”, який має унікальні властивості як нейрональних, так і гемопоетичних клітин.

На підставі одержаних даних уперше запропоновано використання ембріональних клітин при лікуванні судинної патології органа зору. Запровадження цього методу в клінічну практику сприятиме поліпшенню медико-соціальної реабілітації хворих при лікуванні таких тяжких хвороб, як діабетична ретинопатія, гемофтальм, центральна хоріоретинальна дегенерація.

1. Пошук адекватних методів лікування судинної патології ока є актуальною сучасною задачею. Розвиток судинних захворювань вже на ранніх стадіях супроводжується зміною реологічних властивостей крові , основних системних гомеостатичних метаболічних показників, що призводить до вторинних змін локального гомеостазу, з вираженою реакцією імунної системи організму. Тому використання терапевтичних засобів багатофакторної дії є обґрунтованим. Саме такими є препарати ембріонального походження. Для клінічного застосування необхідний повноцінний трансплантаційний матеріал. Кріоконсервування і гіпотермічне зберігання є часткою технологічного процесу клінічного використання цього матеріалу, тому виникає потреба у всебічній оцінці біологічної повноцінності даних трансплантатів з метою підвищення терапевтичної дії. За допомогою цитологічних, цитохімічних, біохімічних, імунологічних, радіоізотопних методів в роботі здійснено комплексну оцінку ембріональних клітин різного походження після впливу низьких температур, описано механізми їх взаємодії з організмом реципієнта, а також доведено ефективність використання при судинній патології.

2. Дослідження щодо гіпотермічного зберігання ембріональних клітин, проведені як на свіжовиділених, так і на препаратах після кріоконсервування, свідчать, що вони зберігають властивості свіжовиділених (нативних) і мають ті ж основні фенотипічні характерні ознаки. Деконсервовані КЕП характеризуються більшою чутливістю до подальшого гіпотермічного зберігання, життєздатність яких зменшується на 16-18% в порівнянні зі свіжовиділеними, починаючи з 2-ї доби, і при подальшому зберіганні ці розходження збільшувалися. Дослідження з гіпотермічного зберігання ембріональних клітин у середовищах різного складу свідчать про те, що найкращі результати морфологічної цілісності клітин спостерігаються при використанні сахарозо-сольовому розчину.

3. Комбінований ембріональний препарат “Гемонейронал” після кріоконсервування і гіпотермічного зберігання має високі показники життєздатності (60,6±0,2%), метаболічної та функціональної активності та фенотипичних ознак. Після кріоконсервування в ембріональних препаратах клітини експресують молекули CD 11a, CD 11b; - CD 18; CD62L в тому об’ємі, що й нативні. Вивчення активності ферментів енергетичного обміну, інтенсивності аеробного й анаеробного гліколізу показало, що після кріоконсервування відбувається зниження активності регуляторних ферментів гліколізу, дегідрогеназ пентозофосфатного шляху і циклу трикарбонових кислот, а також мітохондріальної цитохром-С-оксидази. Зниження метаболізму клітин є транзиторним і відновлюється після реабілітації клітин.

4. Трансплантація ККЕП нормалізує основні метаболічні процеси і є патогенетично виправданим методом лікування експериментального алоксанового діабету й Ат-дефіцитного атеросклерозу, оскільки впливає на порушені показники вуглеводного обміну, прооксидантно-антиоксидантної системи і ліпідного статусу експериментальних тварин. Ведені ККЕП нормалізують і викликають необхідну активацію системного фібринолізу у тварин при експериментальному гемофтальмі; підвищують активність лізосомальних гідролітичних ферментів у тканинах травмованого ока

5. Трансплантація ККЕП і перпарату “Гемонейронал” підвищує функціональні показники органу зору, підтверджуючи ефективний вплив ембріональних препаратів на основні патогенетичні механізми судинної патології (поліпшення зорових функцій порівняно з контрольною групою при діабетичній ретинопатії на 24%, при гемофтальмі на 11%, при ЦХРД на 17%). Найбільш ефективним є парабульбарне і внутрішньовенне введення препаратів ККЕП. Трансплантовані ККЕП мають виражену тропність до патологічного осередку, де реалізують терапевтичний ефект.

6. Трансплантація ККЕП і препарату “Гемонейронал” дозволяє нормалізувати загальну імунореактивність організму хворих на просту діабетичну ретинопатію, а також знизити сенсибілізацію організму тканинами ока, зменшити аутоімунну реакцію, корегувати метаболічні розлади імунної системи.

7. Проведений кореляційний аналіз показав, що підвищення функціональних показників органа зору пов'язано з нормалізацією основних біохімічних метаболічних показників, а також показників імунного гомеостазу.

8. Трансплантація ККЕП виявляє виражену гіпоглікемічну дію при наявності гіперглікемії, а також гіполіпідемічну та антиоксидантну дію у хворих із судинною патологією органа зору, наявністю цукрового діабету й атеросклерозу.

Публікації автора:

1. Демин Ю.А. Использование фетальных клеток печени человека в комплексном лечении некоторых заболеваний роговицы // Международный сб. научн. трудов VII научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств “Лекарства человеку”. - NVII. - М, 1998. - С. 66-69.

2. Демин Ю.А. Патогенетическая коррекция метаболических нарушений введением криоконсервированных КЭП (на моделях экспериментального диабета и атеросклероза). Сообщение I. Влияние трансфузии криоконсервированных КЭП на состояние про- и антиоксидантного гомеостаза и липидный профиль крови при аллоксановом диабете // Проблемы криобиологии. - 2000. - № 2. - С. 94-101.

3. Демин Ю.А. Патогенетическая коррекция метаболических нарушений введением криоконсервированніх КЕП (на моделях єкспериментального диабета и атеросклероза) Сообщение II. Характеристика метаболических нарушений на модели экспериментального антиоксидант-дефицитного атеросклероза и их коррекция клетками криоконсервированніми КЭП // Пробл. криобиологии. - 2000. - № 3. - С. 99-104.

4. Демин Ю.А., Шарлай Т.М. Воздействие трансфузий криоконсервированных клеток эмбриональной печени на состояние коагуляционного и фибринолитического звеньев системы гемостаза при экспериментальном травматическом гемофтальме // Проблемы криобиологии. - 2000. - № 4. – С. 66-71. (Дисертантом отримано дані щодо впливу ККЕП на коагуляційну та фібринолітичну ланки гемостазу при експериментальній патології. Узагальнено одержані результати).

5. Демин Ю.А. Клеточная терапия в офтальмологии // Международный мед. журн. - 2000. - Т. 6, № 3. - С. 53-59.

6. Демин Ю.А. Активность кислой фосфатазы при экспериментальном гемофтальме после трансплантации криоконсервированных клеток эмбриональной печени // Экспериментальная и клиническая медицина. - 2000. - № 4. – С. 20-22.

7. Демин Ю.А., Шарлай Т.М. Патоморфологические аспекты резорбации экспериментального гемофтальма после трансплантации криоконсервированных клеток эмбриональной печени // Укр. медичний альманах. - 2000. - Т. 3, № 6. - С. 78-80. (Дисертантом досліджено морфологію розсисання експериментального гемофтальму після трансплантації ембріональних клітин. Проаналізовано, одержані результати).

8. Семенченко О.А., Петренко А.Ю., Сукач А.Н., Кравченко Л.П., Демин Ю.А. Гипотермическое хранение клеток и тканей эмбрионов человека // Пробл. криобиологии. - 2001. - № 2. - C. 80-84. (Дисертант приймав активну участь у постановці експериментів та узагальненні одержаних результатів).

9. Грищенко В.И., Демин Ю.А., Гончарук Е.И., Попов Н.Н., Петренко А.Ю., Геращенко А.В. Характеристика эмбрионального препарата “Гемонейронал // Пробл. криобиологии. - 2001. - № 3. - С.38. (Дисертантом дана комплексна характеристика нового біологічного препарату “Гемонейронал”).

10. Строна В.И., Демин Ю.А., Шарлай Т.М. Пути миграции криоконсервированных клеток эмбриональной печени при трансплантации в эксперименте // Пробл. криобиологии. - 2001. - № 4. - С. 61-64. (Дисертантом на основі проведених експериментів обґрунтовано міграцію ембріональних клітин при патологічних змінах в організмі реципієнта).

11. Демин Ю.А., Петренко А.Ю. Лечение сосудистой патологии органа зрения трансплантацией криоконсервированных клеток эмбриональной печени // Международный медицинский журнал. - 2001. - Т. 7, № 2. - С. 94-96. (Дисертантом самостійно вдосконалено результати обстеження хворих з судинною патологією після трансплантації ККЕП).

12. Демин Ю.А. Лечение заболеваний и повреждений роговицы методом клеточной терапии // Офтальмологический журн. - 2001. - № 3. - С. 48-51.

13. Дьомін Ю.А. Ефективність методів трансплантації кріоконсервованих клітин ембріональної печінки при експериментальному гемофтальмі // Буковинський медичний вісник. – 2001. - Т. 5, № 2. - С. 180-182.

14. Дьомін Ю.А., Тітяніченко І.В., Бачук Н.Ю. Сучасні методи лікування діабетичної ретинопатії // Одеський мед. журн. - 2001. - Т. 67, № 5. - C. 100-104. (Дисертантом проаналізован сучасний стан проблеми лікування діабетичної ретинопатії, у тому числі застосування клітинної терапії).

15. Демин Ю.А. Активность лизосомальной протеазы катепсину Д при экспериментальном гемофтальме после трансплантации криоконсервированных клеток эмбриональной печени // Укр. медичний альманах. - 2001. - Т. 4, № 3. - С. 52-55.

16. Дьомін Ю.А. Застосування препарату кріоконсервованих гемопоетичних клітин ембріональної печінки людини в лікуванні хворих з судинною патологією органа зору // Укр. медичний альманах. - 2001. - Т. 4, № 4. - С. 48-50.

17. Демин Ю.А. Эффективность трансплантации криоконсервированных клеток эмбриональной печени в комплексном лечении склеротических макулодистрофий // Вісник морської медицини. - 2001. - Т. 16, № 4. - C. 22-28.

18. Дьомін Ю.А., Попов М.М., Романова О.А Особливості імунної реакції реципієнта на кріоконсервований трансплантат фетальних клітин // Клінічна фармація. - 2001. - Т. 16, № 4. - С.29-32. (Дисертантом на підставі самостійно отриманих клінічних даних описана реакція організму реципієнта на введення ембріональних клітин).

19. Дьомін Ю.А., Попов М.М., Романова О.А. Характер порушення імунного гомеостазу у хворих з простими формами діабетичної ретинопатії // Вісник Харків. національного університету ім. В.М.Каразіна. - 2001. - Вип. 2, № 523. - С. 80-84. (Дисертантом вивчено та проаналізовано особливості імунологічних порушень у хворих з діабетичними ретинопатіями).

20. Дьомін Ю.А., Тітяніченко І.В., Бачук Н.Ю. Нові сучасні підходи до лікування геморагічних ускладнень захворювань органа зору // Укр. Журн. екстремальної медицини. -2001. - № 1. - С. 108-112. (Дисертантом проаналізовано сучасний стан проблеми лікування геморагічних ускладнень судинних захворювань органа зору, визначені перспективи використання клітинної терапії).

21. Демин Ю.А., Петренко А.Ю., Гончарук Е.И. Новый препарат “Гемонейронал” в комплексном лечении посттравматического гемофтальма // Укр. Журн. екстремальної медицини. - 2001. - Т. 2, № 4. - С. 57-61. (Дисертантом уперше проаналізовано результати використання нового препарату “Гемонейронал” у хворих з частковим гемофтальмом).

22. Демин Ю.А. Влияние трансплантаций криоконсервированных клеток эмбриональной печени на метаболические показатели больных с ретинальными ангиопатиями // Пробл. криобиологии. – 2002. - № 1. - С. 92-99.

23. Демин Ю.А. Влияние трансплантации криоконсервированных клеток эмбриональной печени на метаболические показатели больных центральными хориоретинальными дистрофиями // Пробл. криобиологии. – 2002. - № 2. - С. 44-49. (Дисертантом описана імунокорегуюча дія ембріональних клітин у хворих з дібатеичною ретинопатією).

24. Дьомін Ю.А., Попов М.М., Романова О.А. Вплив трансплантації кріоконсервованих ембріональних клітин на імуногомеостаз хворих з діабетичною ретинопатією // Буковин. Мед. вісник. - 2002. - Т. 6, № 1. - С. 37-40.

25. Демин Ю.А., Титяниченко И.В. Современные методы лечения макулодистрофий // Пробл. Мед. науки і освіти. – 2002. - № 4. - С. 56-60. (Дисертантом на підставі літературних даних показана перспективність використання клітинної, генної, фотодинамічної терапії в лікуванні макулодистрофії. Проаналізовано стан проблеми в цілому).

26. Пат.32157 А Україна, А61К35/407, А61К35/48. Спосіб лікування діабетичної ретинопатії / В.ІГрищенко ., Ю.АДьомін ., П.А. Бездетко, А.ЮПетренко . - № 98126980; Заявл. 29.12.1998; Опубл. 15.12.2000; Промислова власність. Бюл. № 7-II.

27. Пат.45693 А Україна, А61К35/48, 35/30, 35/407. Препарат “Гемонейронал” для клітинної трансплантації і спосіб лікування судинних патологій органів зору / Грищенко В.І., Гончарук О.І., Петренко О.Ю. Дьомін Ю.А. - № 2001063821; Заявл. 06.06.2001; Опубл. 15.04.2002; Промислова власність. Бюл. № 14.

28. Грищенко В.І., Снурніков О.С., Дьомін Ю.А., Петренко О.Ю., Сукач О.М., Мазур С.П. Отримання цитозолю ембріональних та фетальних тканин та їх клінічне застосування. Метод. рекомендації. - Харків, 2000. - 11 с.

29. Грищенко В.І., Снурніков О.С., Дьомін Ю.А., Петренко О.Ю., Сукач О.М., Мазур С.П. Заготівля, кріоконсервування та клінічне застосування ембріональних та фетальних клітин людини в офтальмологічній практиці. Метод. рекомендації. - Харків, 2000. - 15 с.

30. Грищенко В.І., Снурніков О.С., Дьомін Ю.А., Петренко О.Ю., Гончарук О.І., Сукач О.М., Мікулінський Ю.Ю. Препарат “Гемонейронал” та його застосування для лікування хворих з судинною патологією органа зору. Метод. рекомендації. - Харків, 2001. - 17с.

31. Бездетко П.А., Демин Ю.А. Применение эмбриональных кроветворных клеток печени человека в лечении больных диабетической ретинопатией // Тези доп. IV Міжнародної конф. з офтальмології, Київ, 1-2 жовтня 1998 р. - Київ, 1998. - С. 100.

32. Бездетко П.А., Демин Ю.А. Некоторые подходы к лечению диабетической ретинопатии трансплантацией эмбриональных кроветворных клеток печени человека // Материалы научно-практической конф., посвященной 90-летию больницы им. проф. Л.Л.Гиршмана. “Актуальные вопросы офтальмологии”. - Харьков, 1998. - С. 15.

33. Демин Ю.А. Опыт применения трансплантационной эмбриональной терапии в комплексном лечении диабетических ретинопатий // Тези доп. II Українсько-польської конференції з офтальмології, Трускавець (Україна), 17-18 вересня 1999 р. - Київ, 1999. - С. 150.

34. Grischenko V.I., Demin Y.A., Bezdetko P.A. Complex treatment of diabetic retinophathies using fetall cells // World Congress of Cryobiology “Cryo’99”. - Marseille (France), 1999. - P.59.

35. Демин Ю.А., Лымарь И.Л. Предварительные результаты лечения больных диабетической ретинопатией трансплантацией эмбриональных клеток печени человека // Тезисы докл. VII съезда офтальмологов России, Москва, 16-20 мая 2000 г. - М., 2000. - С. 431.

36. Демин Ю.А. Метод трансплантации эмбриональных криоконсервированных клеток печени человека в лечении диабетических ретинопатий // Матеріали 1-ї Міжнародної конференції “Сучасні аспекти судинно-ендокринних захворювань органа зору: діагностика, профілактика, засоби лікування”, Київ, 2-4 червня 2000 р. - Київ, 2000. - С. 75-76.

37. Демин Ю.А. Трансплантация криоконсервированных эмбриональных клеток печени человека у больных сахарным диабетом II типа с сосудистыми поражениями сетчатки // Тези доповідей наукової конф. офтальмологів, присвяченої 125-річчю з дня народження акад. В.П.Філатова, Одеса, 18-19 травня 2000 р. - Одеса: Астропринт, 2000. - С. 210.

38. Демин Ю.А. Трансплантация гемонейрональных клеток в лечении диабетических ретинопатий // Тези доповідей XII Міжнародного офтальмологічного симпозіуму Одеса-Генуя, 29 червня – 1 липня 2001 р. - Одеса, 2001. - С. 26.

39. Demin Yu.A., Grischenko V.I., Petrenko A.Yu. Application results of Transplantation of Cryopreserved Neuronal cells under Chorioretinal Degenerations // 38^th Мeeting of the Society for Cryobiology “Cryo 2001”, 29 July – 1 August 2001 г. - Edinburgh, 2001. - P. 220.