Анотація до роботи:

Куновський Ю.В. Морфогенетичний аналіз раннього ембріогенезу свиней при одержанні зародків in vitro. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата сільськогосподарських наук за спеціальністю 03.00.15 – генетика. – Інститут розведення і генетики тварин УААН, с. Чубинське, Київської обл., 2007.

Викладено результати застосування комплексного морфогенетичного аналізу при вивченні закономірностей реалізації генетичної інформації в ембріогенезі отриманих in vitro ембріонів свиней. Обґрунтовано доцільність застосування цитогенетичного контролю для оцінки біологічної повноцінності розвитку in vitro ембріонів свиней на підставі вивчення цитоморфологічних особливостей проходження мейозу у незрілих та дозрілих in vitro ооцитах, стану хроматину ядер отриманих in vitro зародків свиней. Показано необхідність проведення початкового відбору морфологічно-нормальних ооцит-кумулюсних комплексів свиней із щільним кумулюсом, однорідною гомогенною ооплазмою. Проаналізовано вплив концентрації клітин гранульози на ядерне (майже 70%) та цитоплазматичне дозрівання ооцитів та визначена оптимальна їх концентрація (3 – 5х10⁶ кл/мл). Вирішено питання зниження чисельної пенетрації сперматозоїдами яйцеклітин завдяки визначенню концентрації сперматозоїдів у середовищі запліднення (0,250 млн/мл) та часу сумісної інкубації гамет (18 год.). Підібрано найбільш збалансоване по складу середовище (NSCU-23) для культивування ембріонів свиней поза організмом (27,8%) до доімплантаційних стадій. Встановлено залежність повноцінності ооцит-кумулюсних комплексів свиней та розвитку ембріонів in vitro від віку тварин-донорів яєчників. Показано, що при осіменінні in vitro яйцеклітин свиней кріоконсервованими епідидимальними сперматозоїдами, середній рівень отримання зигот становить 56,9%, дроблення ембріонів – 48,0% та розвиток зародків свиней in vitro до придатних для трансплантації стадій (морули-бластоцисти) становить 27,0%.

1. Ефективну розробку та застосування біотехнологічних методів у свинарстві забезпечують дослідження генетичних закономірностей ембріонального розвитку. Комплексний морфогенетичний аналіз закономірностей реалізації генетичної інформації в процесі ембріогенезу, дослідження процесу in vitro дозрівання ооцитів свиней, встановлення механізмів їх запліднення поза організмом створює наукову основу для розширення сучасних методів біотехнології в свинарстві.

2. Аналіз цитогенетичних особливостей перетворень хроматину та хромосомних аберацій в мейозі дозволяє визначити оптимальні умови культивування поза організмом ооцитів свиней, які дозволяють досягти майже 80%-го рівня ядерного та цитоплазматичного їх дозрівання.

3. Експериментально доведено, що для більш ефективного отримання ембріонів свиней in vitro необхідно використовувати ооцити із яєчників нестатевозрілих свинок, ооцити яких після дозрівання втрачають клітини кумулюсу, що забезпечувало отримання близько 58% дроблення зигот та отримання in vitro 36% ембріонів на доімплантаційних стадіях.

4. Встановлені генетичні механізми та особливості процесу запліднення in vitro яйцеклітин свиней з використанням кріоконсервованих епідидимальних сперматозоїдів кнурів, на основі яких визначені умови дозрівання ооцит-кумулюсних комплексів, що забезпечують 75 – 80% яйцеклітин на метафазі ІІ мейозу, досягнута ефективність запліднення яйцеклітин, рівень якої становить майже 60%, а розвиток зародків що подолали блок дроблення – в межах 27%.

5. На основі вдосконаленого методу отримання ембріонів свиней in vitro встановлена можливість проведення оцінки запліднювальної здатності сперматозоїдів кнурів протягом 3 – 6 днів, що прискорює оцінку відтворювальних якостей плідників у порівнянні з вимогами "Інструкції із штучного осіменіння свиней" (2003), згідно якої запліднювальну здатність сперми кнура слід перевіряти не менш ніж за п’ятьма еякулятами і осіменінням двадцяти свиноматок.

6. На основі досліджень закономірностей поліспермного in vitro запліднення яйцеклітин свиней встановлено, що для попередження появи аномальних зигот необхідно забезпечувати концентрацію епідидимальних сперматозоїдів кнурів на рівні 250 тис. в 1 мл середовища запліднення, завдяки чому досягається рівень моноспермного запліднення яйцеклітин в межах 65%.

7. На основі цитогенетичного аналізу встановлений взаємозв’язок між зажиттєвою морфологічною характеристикою отриманих in vitro ембріонів свиней і станом хроматину їх ядер. Показано, що отримані in vitro якісні зародки свиней (61,3%) містили морфологічно нормальні ядра з ядерцями. Частина зародків (7,0%), які на основі зажиттєвої оцінки мали незначні ознаки дегенерації (лізис окремих бластомерів або відставання одного із бластомерів у розвитку), поряд із морфологічно нормальним ядрами мали пікнотичні.

8. Розроблені елементи технології отримання in vitro ембріонів свиней з використанням епідидимальних сперматозоїдів кнурів поглиблюють знання закономірностей ембріонального розвитку тварин, сприяють вдосконаленню методів підвищення ефективності використання генетичного матеріалу тварин при збереженні їх генофонду.

Публікації автора:

1. Ковтун С.І., Мелешко Н.Я., Куновський Ю.В. Стан та перспективи використання епідидимальних сперматозоїдів сільськогосподарських тварин для одержання зародків in vitro //Наук. праці Полтавської держав. аграр. академії. – 2002. – Том 1 (20). – С.122 – 124. (Дисертантом зібраний і проаналізований експериментальний матеріал).

2. Ковтун С.І., Косенюк Ю.М., Куновський Ю.В. Вплив мікрохірургічних маніпуляцій на дозрівання in vitro ооцитів свиней //Вісник Сумського НАУ. – 2003. – Вип. 7. – С.98 – 101. (Дисертантом зібраний і узагальнений експериментальний матеріал по дозріванню ооцит-кумулюсних комплексів свиней in vitro).

3. Ковтун С.І., Куновський Ю.В., Мелешко Н.Я. Одержання зародків свиней методом запліднення in vitro //Науковий вісник Львівської національної академії ветеринарної медицини імені С.З. Гжицького. – 2004. – Том 6 (№ 2). Частина 4. – С. 54 – 58. (Дисертантом проведено виконання експериментальної роботи, сформульовано висновки).

4. Куновський Ю.В. Застосування трансплантації ембріонів у свинарстві //Розведення і генетика тварин. – 2006. – Вип. 40. – С. 69 – 74.

5. Куновський Ю.В., Щербак О.В. Отримання зародків свиней in vitro з використання гамет самиць різного віку //Вiсник аграрної науки. – 2006. – №6. – С. 78 – 79. (Дисертантом виконані дослідження і сформульовано висновки).

6. Ковтун С.И., Куновский Ю.В. Влияние клеток гранулезы на получение зародышей свиней in vitro //”Научные проблемы производства продукции животноводства и улучшения ее качества”. Сборник научных трудов – Брянск, 2004. – С. 126 – 129. (Дисертантом виконана експериментальна робота).

7. Куновський Ю.В. Цитогенетичний аналіз різних груп незрілих ооцитів свиней //Конференція молодих вчених та аспірантів. Інститут розведення і генетики тварин УААН – с. Чубинське, 2003. – С.31 – 32.

8. Куновський Ю.В. Проблема поліспермного запліднення при отриманні зародків свиней in vitro //Конф. молодих вчених та аспірантів. Інститут розведення і генетики тварин УААН –Чубинське, 2004. – С. 24 – 25.

9. Ковтун С.І., Басовський Д.М., Куновський Ю.В. Методика одержання доімплантаційних зародків великої рогатої худоби та свиней поза організмом //Методики наукових досліджень із селекції, генетики та біотехнології у тваринництві – К., – 2005. - С. 192 – 200. (Дисертантом висвітлено методичні підходи отримання ембріонів свиней поза організмом).

10. Куновський Ю.В. Використання незрілих ооцитів із яєчників свиней різних вікових груп //Конф. молодих вчених та аспірантів. Інститут розведення і генетики тварин УААН –Чубинське, 2005. – С. 34-36.

11. Ковтун С.И., Куновский Ю.В. Контроль спонтанного партеногенетического развития яйцеклеток коров и свиней в условиях in vitro //ІV Междунар. конференция «Актуальные проблемы биологии в животноводстве» - Боровск, 2006. – С. 244 – 245. (Дисертантом проведено аналіз експериментальних даних, сформульовано висновки).