Анотація до роботи:

Артеменко О.Б. Низькотемпературна консервація статевих і ембріональних клітин птиці. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата сільськогосподарських наук за спеціальністю 03.00.20 – біотехнологія. – Інститут тваринництва УААН, Харків, 2002.

Дослідження виконані в напрямку удосконалення відомих та розробки нових технологій низькотемпературної консервації статевих клітин гусаків та півнів, а також ембріональних клітин курей в облицьованих гранулах та пайєтах. Розроблено технології низькотемпературної консервації сперми гусаків та півнів, що гарантують при їх застосуванні для штучного осіменіння гусей одержання заплідненості яєць на рівні 85,1 – 91,0%, курей - 75 - 85%. Доказана висока ефективність використання флуоресцентного методу для визначення запліднюючої здатності сперми півнів за умовами вживання флуорохромів, що характеризують стан акросом сперматозоїдів, а саме суміші: тіазінового червоного та етідіум броміду або a-нафтіламіну. З використанням цих технології та запасу сперми, що зберігалась в генетичному банку протягом 3 – 9 років, відновлено 3 рідкісних породи курей. Розроблена технологія консервації суспензії ембріональних клітин курей, яка забезпечує збереження життєздатності у 80-90% клітин після їх кріоконсервування, а також флуоресцентний метод визначення їх життєздатності.

1. Розроблений комплекс технологічних прийомів низькотемпературної консервації геномів птиці у вигляді статевих та ембріональних клітин для їх використання при проведенні біотехнологічних досліджень та робіт, в тому числі при конструюванні особин з передбаченими генетичними параметрами, в селекції, генетиці, репродукції, а також для збереження та відновлення малочисельних та зникаючих порід та популяції.

2. Флуоресцентний метод дозволяє швидко (за 3 –10 хвилин) та з високою точністю (коефіцієнт кореляції r=0,93– 0,97) оцінювати запліднюючу здатність сперми півнів за станом акросом при визначенні його за допомогою таких флуорохромів, як a-нафтіламин або суміш тіазинового червоного та етідіум броміда.

3. При заморожуванні сперми півнів з лінійною швидкістю спостерігається масове ушкодження акросом сперматозоїдів в трьох температурних зонах (від 0С до початку кристалізації; -16 - -22С та –80 - -90С), якого можна уникнути шляхом застосування ступінчатого режиму охолодження.

4. Одержання не менше, ніж 30 – 50% життєздатних сперматозоїдів після кріоконсервації та високих показників відтворювання (заплідненість яєць 75-85%, вивід курчат 70-75%) забезпечується при заморожуванні сперми півнів за ступінчастим режимом (спочатку зі швидкістю 3C/хв до початку кристалізації, а після експозиції на плато кристалізації протягом 1 - 3 хвилин зі швидкістю 30C/хв до -16 - -22C, 70C/хв до -80 - -90C з послідуючим занурюванням в рідкий азот), розморожуванні при 40C та використанні для штучного осіменіння курей в дозі 0,12 мл та з інтервалом один раз в три - чотири доби.

5. Відомий кріопротектор диметилформамід найкраще здійснює захисну функцію відносно сперматозоїдів півнів при додаванні його до середовища С-2 (г%: глутамат натрію – 2,85, глюкоза – 0,50, інозіт – 0,25, ацетат магнію – 0,07, ацетат калію – 0,50, полівінілпірролідон – 0,20, протамін сульфат – 0,028, вода тощо) до кінцевої концентрації 7% та при застосуванні двохетапного режиму розбавлення сперми.

6. Сперма гусаків зберігає високу запліднюючу здатність (заплідненість яєць 85,1 – 91,0%, вивід гусенят 66,3 – 72,9%) після ії низькотемпературної консервації в облицьованих гранулах об’ємом 0,3 мл за ступінчастим режимом (зі швидкістю 50С/хв від 0С до -86С, а потім зі швидкістю 8 - 15С/хв до -196С) під захистом диметилформаміду в кінцевий концентрації 10% та при вживанні захисного середовища В-26.

7. Низькотемпературна консервація суспензії ембріональних клітин курей в пайєтах можлива з високою результативністю (життєздатність зберігають до 80 – 90% клітин) під захистом диметилсульфоксиду в фосфатно-сольовому буфері за умови його ступінчастого введення при температурі 20С до кінцевої концентрації 10% та при охолодженні зі швидкістю 1С/хв до -30С з послідуючим занурюванням в рідкий азот.

Публікації автора:

1. Сахацкий Н.И., Терещенко А.В., Артеменко А.Б. Экспресс-метод оценки оплодотворяющей способности замороженно-оттаянной спермы с.-х. птицы // С.- х. биология. - 1987. - N 12. -С. 77-80. (автором особисто розроблено 50%).

2. Сахацкий Н.И., Терещенко А.В., Артеменко А.Б. Усовершенствование способа определения качества спермиев // Птицеводство: Межвед. темат. науч. сб./ УНИИП, 1989. - Вып.42. – С. 23-27. (автором особисто розроблено 50%).

3. Артеменко А.Б., Терещенко А.В., Новиков А.Н., Линник Т.П. Криоконсервирование спермы петуха // Птицеводство: Межвед. темат.науч. сб./ УНИИП, 1990. - Вып. 43. - С. 14-17. (автором особисто виконано 50%).

4. Сахацкий Н.И., Терещенко А.В., Артеменко А.Б. Технология замораживания спермы петухов // Птицеводство. - 1991. - N 5. - С.10-11. (автором особисто розроблено 50%).

5. Терещенко А.В., Артеменко А.Б., Тагиров М.Т., Белецкая А.В., Сахацкий Н.И. Низкотемпературная консервация бластодермальных клеток эмбрионов кур // С.-х. биология. - 1993. - N 6. - C. 53-58. (автором особисто виконано 80%).

6. Линник Т.П., Терещенко А.В., Артеменко А.Б Влияние белковых добавок к криозащитной среде на сохранность спермиев петуха при криоконсервировании // Проблемы криобиологии. - 1996. - N 2. - С.35-39. (автором особисто виконано 33%).

7. Линник Т.П., Грищенко В.И., Артеменко А.Б., Терещенко А.В. Влияние осмотичности криозащитной среды на сохранность спермиев петуха при криоконсервировании // Проблемы криобиологии. - 2000, - N 2, - С.86-93. (автором особисто виконано 30%).

8. Линник Т.П., Грищенко В.И., Артеменко А.Б., Терещенко А.В. Влияние длительного низкотемпературного хранения спермы петухов на ее оплодотворяющую способность // Проблемы криобиологии. - 2000, - N 3, - С.64-71. (автором особисто виконано 50%).

9. А.с. 1329780 СССР. МКИ А61Д 7/02. Способ определения качества спермиев / Терещенко А.В., Сахацкий Н.И., Артеменко А.Б. – №4035697/30-15; Заявлено 24.03.86; Опубл. 15.08.87; Бюл. N 30. - 3 c. (автором особисто розроблено 50%).

10. А.с. 1475645 СССР. МКИ А61D 7/02. Способ определения оплодотворяющей способности спермиев / Терещенко А.В., Сахацкий Н.И., Артеменко А.Б. - № 4241244/30-15; Заявлено 07.05.87; Опубл. 30.04.89; Бюл. N 16. - 3 c. (автором особисто розроблено 50%).

11. А.с. 1524882 СССР. МКИ А61D 7/02. Способ криоконсервации спермы птиц / Сахацкий Н.И., Терещенко А.В., Новиков А.Н., Линник Т.П. Артеменко А.Б. - № 4395197/30-15; Заявлено 22.03.88; Опубл. 30.11.89; Бюл. № 44. - 4 c. (автором особисто розроблено 40%).

12. Sakhatsky N.I., Andreyev V.I, Artemenko A.B. Technology of goose sperm low temperature conservation // 10-th European symp. on waterfowl: Preliminary proc. (march 26-31,1995). - , Halle (Salle), Germany. - 1995. - P.226-228. (автором особисто виконано 50%).