Горницька Ольга Володимирівна. Одержання, характеристика і використання ферментів отрути щитомордника звичайного (Agkistrodon halys halys) : Дис... канд. наук: 03.00.20 - 2002.
Анотація до роботи:
Горницька О.В. Одержання, характеристика і використання ферментів отрути щитомордника звичайного (Agkistrodon halys halys). – Рукопис.
Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.20 - Біотехнологія. – Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України. Київ, 2002.
Дисертація присвячена одержанню, очищенню, характеристиці і застосуванню ферментів, що містяться в отруті щитомордника звичайного (Agkistrodon halys halys).
Виявлено, що отрута щитомордника звичайного у своєму складі містить ферменти, які діють на систему зсідання крові і фібриноліза: тромбіноподібний фермент Анцистрон-Н, активатор протеїну С, фібриногенолітичний фермент, інгібітор агрегації тромбоцитів. Запропоновано прості та високоефективні методи виділення й очищення зазначених ферментів. Досліджено можливі області застосування отриманих препаратів.
Показано, що фібриногенолітичний фермент відноситься до класу a–фібриногеназ: під дією ферменту в початковий період реакції руйнується Aa-ланцюг фібриногену. За фізико-хімічними властивостями отриманий фермент подібний до фібриногенолітичних ферментів, виділених з отрути інших видів змій роду Agkistrodon. Передбачається, що даний фермент може бути використаний при вивченні структурних і функціональних взаємодій систем зсідання крові і фібриноліза, а також може мати практичний інтерес для використання в медицині як дефібринуючий агент.
Виділено, очищено та охарактеризовано активатор протеїну С. Показано, що для активації протеїну С активатором з отрути щитомордника не потрібні тромбін, тромбомодулін і кальцій, що збігається з властивостями активаторів протеїну С, виділених з отрути змій інших видів. Відзначено високу швидкість активації протеїну С отриманим ферментним препаратом, що дозволяє використовувати його в клінічній практиці для визначення рівня протеїну С. На основі препарату активатора протеїну С розроблено діагностичний тест для визначення рівня протеїну С у плазмі крові в нормі та у випадку порушення функціонування системи гемостазу.
Перевірено дію інгібітору агрегації тромбоцитів на АДФ-стимульовану агрегацію тромбоцитів. Показано значне уповільнення швидкості агрегації при введенні отриманого препарату в збагачену тромбоцитами плазму крові.
На основі ферментів отрути щитомордника створено комплекс діагностичних тестів для визначення стану системи гемостазу при патологіях. Тести є інформативними, високочутливими, простими у використанні. Розроблено алгоритм діагностики стану системи гемостазу при цукровому діабеті і тест, що дозволяє прогнозувати тромботичні ускладнення при регматогенному відшаруванні сітківки ока в постопераційний період.
1. Проаналізовано склад отрути щитомордника звичайного (Agkistrodon halys halys). Встановлено, що отрута змії містить ферменти, які мають вплив на систему зсідання крові і фібриноліза: тромбіноподібний фермент Анцистрон-Н, активатор протеїну С, фібриногенолітичний фермент, інгібітор агрегації тромбоцитів. Запропоновано технологічні методи виділення й очищення зазначених ферментів. Досліджено можливі області застосування отриманих препаратів.
2. При вивченні фізико-хімічних і біологічних властивостей фібриногенолітичного ферменту показано, що одержаний препарат може служити інструментом для вивчення білок-білкових взаємодій в системі фібриноген/фібрин.
3. Показано, що препарат виділеного активатора протеїну С є рівноцінним фірмовому препарату Protac за активністю, але перевершує його за доступністю та економічним показникам.
4. Вперше на основі ферментів отрути щитомордника створено комплекс діагностичних тестів та доведено їх практичну придатність для визначення порушень стану системи гемостазу. Розроблено алгоритм діагностики стану системи гемостазу при цукровому діабеті.
5. Розроблено діагностичний тест для визначення рівня протеїну С у плазмі крові в нормі та при порушеннях функціонування системи гемостазу. Запропоновано спосіб прогнозування тромботичних ускладнень при регматогенному відшаруванні сітківки ока.
6. Виявлено кореляцію між накопиченням розчинного фібрину та скороченням часу зсідання в тестах „Тромбіновий час” та „Анцистроновий час”, що дає можливість використовувати тромбіноподібний фермент в скрінінг-тесті для визначення ВЗК-синдрому.
Публікації автора:
Угарова Т.П., Мельник В.Н., Горницкая О.В. Тромбиноподобный фермент из яда Agkistrodon blomhoffii // ДАН УССР, Серия Б. – 1985. – №4. – С. 79-82.
Т.М. Платонова, Т.М. Чернишенко, О.В. Горницька, О.М. Савчук, Л.І. Соколовська, М.Ш. Гамісонія, Є.М. Макогоненко Лабораторна діагностика стану системи гемостазу // Укр. біохім. журн. – 2000. – т.72, №6. – С. 67-73.
Т.М. Платонова, Т.М. Чернишенко, О.В. Горницька, О.М. Савчук, Л.І. Соколовська, М.Ш. Гамісонія, Є.М. Макогоненко Лабораторна діагностика порушень системи гемостазу при дисемінованому внутрішньосудинному зсідання крові // // Лаб. діагностика. – 2000. - №3. – С. 3-11.
Т.М. Платонова, О.В. Горницька, Є.Д. Мороз Застосування активатора протеїна С з отрути щитомордника звичайного (Agkistrodon halys halys) для визначення активності протеїну С у плазмі крові за різних патологій // Лаб. діагностика. – 2001. - №3. – С. 28-31.
Т.М. Платонова, О.В. Горницька, І.П. Метеліцина, О.М. Савчук Компоненти системи зсідання крові та фібринолізу в субретинальній рідині у людей з регматогенним відшаруванням сітківки ока // Мед. хімія. – 2001. – т. 3, №4. – С. 5-8.
О.В. Горницкая, И.Н. Ровинская, Т.Н. Платонова Выделение и свойства фибринолитического фермента, выделенного из яда щитомордника обыкновенного (Agkistrodon halys halys) // Укр. биохим. журн. – 2002. – Т. 74, № 3. – С. 42-49.
Платонова Т.М., Савчук О.М., Горницька О.В., Чернишенко Т.М., Гарбарчук О.І., Волков Г.Л. Особливості порушень стану системи гемостазу при цукровому діабеті // Мед. хімія. – 2002. – Т.4, №2. – С. 5-9.
О.В. Горницька Використання ферментів з отрути щитомордника звичайного (Agkistrodon halys halys) для діагностики порушень стану системи гемостазу (тези доповіді) // Укр. біохім. журн. – 2002. – Т. 74, № 4б (додаток 2). – С. 177.
Спосіб прогнозування тромботичних ускладнень при регматогенному відшаруванні сітківки ока / Горницька О.В., Платонова ТМ., Метеліцина І.П. / Пат. 43248 А Україна А 61 У5/145, 2001р. Опубл. бюл. №10, 2001р.
