Анотація до роботи:

Задорожна М.Б. Роль a-2-антиплазміну на різних етапах фібринолітичного процесу. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.04. – біохімія. – Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України. Київ, 2006.

Дисертацію присвячено дослідженню регуляторної ролі a-2-антиплазміну – основного інгібітору плазміну – на різних етапах фібринолітичного процесу.

Виявлено, що в утворенні комплексу плазміну з a-2-антиплазміном приймають участь лізинзв’язувальні ділянки кринглів 1-3, 4, 5 та ділянка серин-протеїназного домену молекули ферменту, відмінної від активного центру. Багатоцентрова взаємодія плазміну з a-2-антиплазміном забезпечує специфічність та ефективність дії інгібітора. Результати вивчення кінетики інгібування a-2-антиплазміном амідолітичної активності плазміну, міні- та мікро-плазміну показали, що кринглові домени молекули ферменту не є необхідними для процесу інгібування, але контролюють швидкість реакції між плазміном та a-2-антиплазміном.

Вперше показано, що a-2-антиплазмін взаємодіє з фібрин(оген)ом за відсутності активованого фактора ХІІІ. Ділянки зв’язування розташовані в D-доменах молекули фібрин(оген)у в зоні D-D-контакту.

Встановлено інгібуючий вплив a-2-антиплазміну на процес активації Glu-плазміногену тканинним активатором на фібрині і, як наслідок, на лізис фібринових згустків.

Показано, що a-2-антиплазмін утворює комплекс з тканинним активатором плазміногену за участі лізинзв’язувальної ділянки кринглу 2 молекули активатора. Комплексоутворення не супроводжується зміною амідолітичної активності тканинного активатора. Інгібітор не впливає на взаємодію тканинного активатора плазміногену з фібрином.

Запропоновано дві моделі, що пояснюють інгібуючий вплив -2-антиплазміну на процес активації Glu-плазміногену тканинним активатором на фібрині.

Розроблено новий спосіб одержання -2-антиплазміну, що дозволяє в один етап з плазми крові людини, виснаженої на плазміноген, виділити інгібітор без домішок гістидинбагатого білка.

1. -2-Антиплазмін є високоспецифічним інгібітором плазміну, який захищає білки плазми від неспецифічного протеолізу і запобігає передчасному руйнуванню фібринового згустка. В роботі представлено результати вивчення взаємодії інгібітора з різними компонентами системи фібринолізу та гальмування -2-антиплазміном процесу активації Glu-плазміногену тканинним активатором на фібрині.

2. Встановлено багатоцентрову взаємодію плазміну з -2-антиплазміном за участі кринглів 1-3, 4 та 5 та додаткової ділянки серин-протеїназного домену молекули ферменту.

3. Кринглові домени молекули плазміну контролюють швидкість реакції між ферментом та інгібітором, але не є необхідними для процесу інгібування плазміну -2-антиплазміном.

4. Вперше показано, що -2-антиплазмін взаємодіє з фібрин(оген)ом без участі активованого фактора ХІІІ. Інгібітор проявляє високу спорідненість до дезАА- (Кd 69,0 нМ), дезААВВфібрину (Кd 68,6 нМ), D-фрагменту фібриногену (Кd 119,0 нМ), D-димеру фібрину (Кd 65,0 нМ), але не сорбується на Е-фрагменті.

5. Виявлено, що -2-антиплазмін інгібує активацію Glu-плазміногену тканинним активатором на фібрині та його фрагментах: D-димері та DDE-комплексі та не впливає на активацію проферменту на фрагменті фібриногену Ho 1-DSK.

6. Інгібування -2-антиплазміном процесу активації пояснюється створенням стеричних перешкод для взаємодії Glu-плазміногену з тканинним активатором або конформаційними змінами в молекулі тканинного активатора плазміногену при взаємодії з -2-антиплазміном.

7. Розроблено спосіб одержання -2-антиплазміну з високою інгібіторною активністю без домішок гістидинбагатого білка.

Публікації автора:

1. Гриненко Т.В., Юсова О.І., Задорожна М.Б., Макогоненко Є.М. Особливості взаємодії a₂-антиплазміну з плазміногеном/плазміном // Укр.біохім.журн. – 2002. – 74, №6. – С.83–90.

2. Задорожна М.Б., Гриненко Т.В., Юсова О.І., Волков Г.Л. Зв’язування -2-антиплазміну з фібриногеном/фібрином та їхніми фрагментами без участі фактора ХІІІ // Укр.біохім.журн. – 2004. – 76, №5. – С.71–77.

3. Задорожная М.Б., Гриненко Т.В., Волков Г.Л. Использование кринглов 1-3 молекулы плазминогена для разделения гистидин-богатого белка и альфа-2-антиплазмина // Буковинський медичний вісник. – 2005. – 9, № 2. с. 99–100.

4. Гриненко Т.В., Задорожна М.Б., Платонова Т.М., Волков Г.Л. Інгібування -2-антиплазміном процесу активації Glu-плазміногену тканинним активатором на фібрині, DDE-комплексі та D-димері // Укр.біохім.журн. – 2005. – 75, №5. – С.45–51.

5. Пат. UA 53146 C2. Спосіб виділення високоочищеного А₂-антиплазміну з плазми крові людини: Пат. UA 53146 C2 Гриненко Т.В., Макогоненко Є.М., Юсова О.І., Задорожна М.Б., Волков Г.Л.; Заявл. 22.03.2002; Опубл. 15.01.2003, Бюл.№1.

6. Задорожна М.Б. Багатоцентрова взаємодія a₂-антиплазміну з плазміногеном/плазміном // Тез. доп. конференції-конкурсу робіт молодих вчених. – Укр. біохім. журн. – 2002 – 74, № 4. – с. 156.

7. Задорожна М.Б., Гриненко Т.В., Юсова О.І. Дослідження кінетики інгібування a₂-антиплазміном плазміну та його похідних // Тез. доп. VIII Українського біохімічного з‘їзду. – Укр. біохім. журн. – 2002. – 74, № 4б (додаток 2). – с. 31.

8. Задорожная М.Б., Юсова Е.И., Гриненко Т.В. Локализация участков связывания a₂-плазмина независимых от фактора ХIII на полимерном фибрине // Тез. докл. 7 школы-конференции молодых ученых „Биология – наука ХХІ века”. – Пущино, 2003. – с. 331–332.

9. Задорожна М.Б., Юсова О.І., Гриненко Т.В. Роль a₂-антиплазміну в молекулярному механізмі фібринолізу // Тез. доп. Всеукр. конференции молодых ученых „Актуальные проблемы современного естествознания”. – Симферополь, 2003. – с. 38.

10. Grinenko T.V., Volkov G.L., Havriliuk O.S., Yusova O.I., Zadorozhnaya M.B. Triple affinity columns package for one step high purification of the alpha-2-plasmin inhibitor and histidine-rich glycoprotein directly from human plasma // Plasma product biotechnology meeting 2003. – Curacao, 2003. – p. 703.