Анотація до роботи:

Ярошенко Т.Я. Роль оксиду азоту в механізмах ураження печінки ксенобіотиками. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.04 – біохімія. – Інститут біології тварин УААН, Львів, 2007.

Дисертація присвячена комплексному дослідженню ролі системи синтезу NO в патогенезі ураження печінки аліловим спиртом (АС). Встановлено, що інтоксикація АС супроводжується пригніченням ендотеліальної і активацією індуцибельної форми NO-синтази. Показано, що дисбаланс в системі синтезу NO при некротичному ураженні печінки тісно пов’язаний з активацією вільнорадикальних реакцій в гепатоцитах, пригніченням функціонального стану антиоксидантної системи, розладами діяльності ферментів дихального ланцюга мітохондрій і, як наслідок, ступенем некротичних змін в печінці.

Продемонстровано, що при хімічному ураженні печінки загальне пригнічення NO-синтази неселективним інгібітором L-NAME суттєво погіршує перебіг патологічного процесу (активуються показники вільнорадикального окиснення, пригнічується антиоксидантна система і мітохондріальне дихання, підвищується ступінь цитолітичних процесів в гепатоцитах). В той же час, вибіркове пригнічення індуцибельної форми NO-синтази за допомогою селективного інгібітора N-(3-(амінометил)бензил)ацетамідину (1400W) позитивно впливає на патобіохімічні зміни у печінці при її хімічному ураженні і частково запобігає некротичним процесам.

L-аргінін запобігає вивільненню ендотеліальної NO-синтази в печінці, покращує її функціональний стан і, як наслідок, стимулює утворення NO в капілярах і синусоїдах печінки, покращуючи тим самим мікроциркуляцію в органі. Застосування L-аргініну при токсичному гепатиті, індукованому аліловим спиртом, призводить до часткової нормалізації патологічних змін в печінці і дещо попереджає розвиток цитолізу в гепатоцитах. Новітній донор NO – (+-)-(Е)-етил-2-[(Е)гідроксиіміно]-5-нітро-3-гексенамід (FK409) також проявляє позитивну дію при ураженні печінки АС, проте ефективність даного препарату є нижчою, ніж L-аргініну.

Поєднане застосування селективного інгібітора індуцибельної форми NO-синтази 1400W, з метою попередження надмірного утворення токсичного NO в купферівських клітинах печінки і гепатоцитах, з L-аргініном, який стабілізує ендотеліальну NO-синтазу, запобігаючи тим самим ішемічним змінам у печінці, є ефективною патогенетично обґрунтованою комбінацією засобів корекції патобіохімічних змін у печінці при її ураженні некрозогенними ксенобіотиками.

У дисертації наведено теоретичне узагальнення і нове вирішення наукового завдання, що полягає в комплексному дослідженні регуляторної ролі оксиду азоту в патогенезі токсичного ураження печінки. Вперше показано, що некротичні зміни у хворому органі пов’язані з дисбалансом між конституційною (ендотеліальною) та індуцибельною формами NO-синтази у печінці. Запропоновано нові підходи до корекції патологічних змін у печінці при її хімічному ураженні аліловим спиртом за допомогою _{інгібіторів NO-синтази і} донорів NO.

1. Експериментальне ураження печінки аліловим спиртом супроводжується пригніченням в 3,5 раза активності ендотеліальної _{NO-синтази і}з одночасною активацією її індуцибельної форми на першу добу після отруєння. При цьому зростає в 1,8 раза загальна активність NO-синтази і в 2 рази вміст нітритів і нітратів у крові.

2. Системні порушення синтезу оксиду азоту при токсичному ураженні печінки аліловим спиртом тісно корелюють із інтенсифікацією вільнорадикальних реакцій: зростання більше ніж у 2 рази показників спонтанної та індукованої хемілюмінесценції тканин печінки і плазми крові, посилення процесів ліпопероксидації (рівень малонового діальдегіду в тканинах печінки зростав у 2,7-3,2 раза) і посилення окисної модифікації білків (концентрація альдегід- і кетонопохідних амінокислот збільшувалася в 1,6-1,7 раза). Одночасно з цими змінами відбувається пригнічення

активності системи антиоксидантного захисту гепатоцитів (активність каталази зменшувалася більше, ніж у 2 рази, а рівень SH-груп – в 1,7 раза у печінці контрольної групи тварин, яким вводили аліловий спирт).

3. Порушення процесів синтезу NO і окиснювальних реакцій при експериментальному ураженні печінки аліловим спиртом супроводжується розвитком деструктивних процесів у гепатоцитах, на що вказує пригнічення активності мембранозв’язаних ферментів мітохондрій (активність сукцинатдегідрогенази і цитохромоксидази знижувалася в 1,7 і 2,0 рази відповідно) з одночасним підвищенням в плазмі крові активності ензиматичних маркерів цитолізу - АлАТ і АсАТ - в 9 і 8 разів, відповідно, та із достовірним зростанням у 2 рази вмісту маркерів ендогенної інтоксикації – молекул середньої маси.

4. Пригнічення активності NO-синтази за допомогою неселективного інгібітора L-NAME при некротичному ураженні печінки ускладнює перебіг патологічного процесу, що проявляється у посиленні активованих аліловим спиртом вільнорадикальних реакцій, ще більшому пригніченні функціонування системи антиоксидного захисту, інгібуванні активності ферментів дихального ланцюга мітохондрій і зростанні ступеня деструкції гепатоцитів, який оцінювали за збільшенням активності амінотрансфераз і концентрації молекул середньої маси.

5. Вибіркове пригнічення активності індуцибельної форми NO-синтази за допомогою високоселективного інгібітора N-(3-(амінометил) бензил)ацетамідину (1400W) ефективно запобігає порушенню окиснювальних процесів і розвитку некротичних змін у печінці при гострому отруєнні тварин аліловим спиртом.

6. Введення тваринам із токсичним гепатитом попередника оксиду азоту L-аргініну, або новітнього спонтанного донатора оксиду азоту

(+-)-(Е)-етил-2-[(Е)гідроксиіміно]-5-нітро-3-гексенаміду (FK409), сприяє поліпшенню функціональної спроможності ендотеліальної форми NO-синтази, частково запобігає активації вільнорадикальних процесів, позитивно позначається на функціонуванні мітохондріальних ферментів – сукцинатдегідрогенази і цитохромоксидази і частково перешкоджає розвитку деструктивних процесів у печінці. Позитивний ефект L-аргініну виявився більш вираженим, ніж такий ефект FK409.

7. Вибіркове пригнічення активності індуцибельної форми NO-синтази за допомогою високоселективного інгібітора 1400W із одночасним поліпшенням функціонального стану ендотеліальної форми NO-синтази за допомогою L-аргініну є ефективною комбінацією засобів корекції хімічного ураження печінки. Таке поєднання препаратів суттєво поліпшує показники більшості патобіохімічних процесів, що лежать в основі розвитку токсичного гепатиту, індукованого аліловим спиртом.

Публікації автора:

1. Ярошенко Т.Я. Роль порушень системи оксиду азоту в механізмі токсичного ураження печінки аліловим спиртом // Наукові записки Тернопільського педуніверситету. Серія: „Біологія”. – 2006. – № 1 (28). – С. 107 - 110.

2. Ярошенко Т.Я. Ефект поєднаного застосування інгібітора індуцибельної NO-синтази N-(3-Aмінометил)бензил)ацетамідину і субстрату синтази оксиду азоту L-аргініну на гепатотоксичність алілового спирту // Медична хімія. – 2006. – № 3 (8). – С. 130 - 133.

3. Ярошенко Т.Я. Вплив донаторів оксиду азоту на перебіг токсичного ураження печінки аліловим спиртом у білих щурів // Біологія тварин. – 2006. – T. 8, № 2. – C. 210-214

4. Корда М.М., Ярошенко Т.Я. Вплив інгібітора індуцибельної синтази оксиду азоту N-(3-(Aмінометил)бензил)ацетамідину на гепатотоксичність алілового спирту // Медична хімія. – 2004. - № 3 (6). – С. 114 – 116. (Дисертанту належить підготовка матеріалу для досліду, дослідження впливу високоселективного інгібітора iNOS N-(3-(Aмінометил)бензил)ацетамідину на перебіг токсичного гепатиту, викликаного аліловим спиртом, пошук та аналіз даних літератури, участь в аналізі результатів та написання статті).

5. Корда М.М., Ярошенко Т.Я. Роль оксиду азоту в патогенезі ураження печінки ксенобіотиками // Медична хімія. – 2005. - № 3 (7). – С. 74 – 80. (Дисертанту належить пошук та аналіз даних літератури, участь в написанні висновків та написання і підготовка статті до друку).

6. Ярошенко Т.Я. Процеси вільнорадикального окислення за умов токсичного ураження печінки аліловим спиртом // Матеріали XLIХ підсумкової науково-практичної конференції „Здобутки клінічної і експериментальної медицини” (2 червня 2006 року). – Тернопіль: Укрмедкнига, 2006. – С. 176 -178.

1. Yaroshenko T., Korda M. Role of nitric oxide in chemically induced hepatotoxicity. //Annales universitatis mariae curie-sklodowska. Pharmacia. – 2006. – Vol. 19, № 1. – P. 143-146 . (Дисертант брала участь у проведенні досліджень, статистичній обробці результатів, аналізі експериментальних даних, написанні та оформленні статті).

2. Ярошенко Т.Я. Позитивний ефект N-(3-(Aмінометил)бензил)ацетамідину при некротичному ураження печінки // Матеріали XLVIII підсумкової науково-практичної конференції „Здобутки клінічної і експериментальної медицини” (3 червня 2005 року). – Тернопіль: Укрмедкнига, 2005. – С. 221.

3. Вплив інгібітора синтази оксиду азоту на гепатотоксичність алілового спирту // Ярошенко Т.Я., Омеляш В., Лошній В., Переслицький М. // 8-й міжнародний медичний конгрес студентів і молодих учених, приурочений до 150 – ліття від дня народження І.Я. Горбачевського (10 – 12 травня 2004 року). – Тернопіль: Укрмедкнига, 2004. – С. 155. (Дисертант брала участь у проведенні досліджень, статистичній обробці результатів, аналізі експериментальних даних, написанні та оформленні тез).

4. Ярошенко Т.Я. Вплив інгібіторів оксиду азоту на процеси ліпопероксидації за умов токсичного гепатиту // 10-й міжнародний медичний конгрес студентів і молодих учених (11 – 13 травня 2006 року). – Тернопіль: Укрмедкнига, 2006. – С. 202.

5. Ярошенко Т.Я. Вплив інгібіторів синтази оксиду азоту на стан окиснювальної модифікація білків при некротичному ураженні печінки // Материалы 78-й научно-практической конференции студентов и молодых ученых «Теоретические и практические аспекты современной медицины» - Сімферополь, 2006. – С. 96.

6. Ярошенко Т.Я. Позитивний ефект субстрату NO-синтази L-аргініну на гепатотоксичність алілового спирту // Медична хімія. – 2006. – Т. 8, № 4. – С. 133.