Анотація до роботи:

Діденко Г. В. Розробка протипухлинних аутовакцин на основі білоквмісних метаболітів B. subtilis В-7025 та їх вплив на окремі реакції протипухлинного імунітету (експериментальні дослідження). – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 14.01.07 – онкологія. – Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України, Київ, 2008.

Дисертація присвячена пошуку активних цитотоксичних компонентів в фільтраті культуральнї рідини (ФКР) B. subtilis В-7025, конструюванню з їх використанням протипухлинних вакцин та порівняльному вивченню впливу даних вакцин на імунні реакції тварин з модельним пухлинним процесом.

У результаті проведених досліджень вдалося виділити та охарактеризувати дві фракції ФКР B. subtilis В-7025, які були збагачені окремими білками і проявляли цитотоксичну дію на пухлинні клітини в тестах in vitro – компонент (18,5 кДа) та компонент (70 кДа). Дані компоненти відрізняються за біохімічними характеристиками, впливом на пухлинні клітини та пептидним профілем вакцин (ПВ), виготовлених з їх використанням. Дослідження протипухлинної дії вакцин, сконструйованих на основі вищезгаданих компонентів, показало їх ефективність в експериментах in vivo на різних моделях пухлинного росту (саркома 37, КЛЛ, лімфолейкоз мишей L1210 та рак Ерліха). При аналізі імунологічних ефектів, викликаних ПВ, було встановлено, що реалізація протипухлинної дії вакцин відбувається за рахунок високого рівня антитілозалежних реакцій (р<0,05), опосередкованих клітинами лімфоцитарного та макрофагального ряду, які проявляються як результат відміни блокуючої дії сироватки на пізніх етапах дослідження (21-а доба).

На основі кореляційного аналізу одержаних результатів було встановлено, що динаміка імунологічних ефектів, викликаних застосуванням вакцин в більшості випадків була однотипною (ЦТА Лц =0,62; АЗЦ Мф =0,8; кооперативна ЦТА Мф і Лц =0,64; кооперативна АЗЦ Мф і Лц =0,66). Але за динамікою впливу на реакції (АЗЦ Лц =0,21; ЦТА Мф =0,31) суттєво відрізнялися, що, скоріш за все, і зумовило різницю їх протипухлинної дії.

Робота присвячена проблемі імунотерапії злоякісних новоутворень, а саме пошуку активних цитотоксичних компонентів ФКР B. subtilis В-7025, конструюванню з їх використанням протипухлинних вакцин та порівняльному вивченню впливу даних вакцин на імунні реакції тварин з модельним пухлинним процесом.

1. Вперше з фільтрату культуральної рідини B. subtilis В-7025 виділено та охарактеризовано дві активні білоквмісні фракції, які проявляють цитотоксичну дію на пухлинні клітини – компонент (18,5 кДа) та компонент (70 кДа).

2. Показано, що компонент (18,5 кДа) реалізує цитотоксичну активність за рахунок протеолітичної дії, а компонент (70 кДа) – за рахунок зв’язування з мембраною пухлинних клітин та «злущування» з її поверхні білків. Обидва компоненти викликають некротичну загибель пухлинних клітин.

3. Встановлено, що отримані компоненти мають імуномодулюючі властивості при імунізації інтактних тварин та тварин з модельним пухлинним процесом. Крім того, компонент (70 кДа) має виражені імуноад’ювантні властивості, що проявляється у активації антитілопродукуючої функції організму.

4. Вакцини, сконструйовані на основі пухлинних клітин та цитотоксичних компонентів ФКР (18,5 кДа та 70 кДа), виявились ефективними у експериментах in vivo на моделях епітеліальних та сполучнотканинних злоякісних пухлин; їх використання подовжувало середню тривалість життя тварин від 23,8 % до 75,0 %.

5. Протипухлинна дія розроблених вакцин проявляється за рахунок суттєвого підвищення (р<0,05) антитілозалежних реакцій, опосередкованих клітинами лімфоцитарного та макрофагального ряду, та пов’язана з відміною ефекту блокуючої дії аутологічної сироватки на пізніх етапах пухлинного росту.

6. На основі кореляційного аналізу було встановлено, що динаміка імунологічних ефектів, викликаних застосуванням вакцин, в більшості випадків була однотипною: ЦТА Лц (=0,62); АЗЦ Мф (=0,8); кооперативна ЦТА «Мф+Лц» (=0,64); кооперативна АЗЦ «Мф+Лц» (=0,66). Але за динамікою впливу на реакції АЗЦ Лц (=0,21 та ЦТА Мф (=0,31) досліджені ПВ суттєво відрізнялися, що, скоріш за все, і зумовило різницю їх протипухлинної дії.

Публікації автора:

1. Модуляция антигенных свойств опухолевых клеток с помощью продуктов метаболизма Bac. mesentericus АБ-56 / Г. П. Потебня, В. А. Семерников, С. В. Хуторной, Г. С. Лисовенко, Г. В. Диденко, Е. А. Колесник // Эксп. онкология. – 1999. – Т. 21, № 3–4. – С. 223–227. (Особистий внесок дисертанта: проведення імуноферментного аналізу, статистична обробка отриманих даних).

2. Влияние противоопухолевой аутовакцины на некоторые показатели иммунного статуса больных с аденокарциномой прямой кишки / Г. П. Потебня, В. А. Семерников, С. В. Хуторной, Г. С. Лисовенко, Е. А. Колесник, Е. В. Тележинская, Г. В. Диденко, В. А. Шляховенко // Эксп. онкология. – 2001. – Т. 23, № 3. – С. 189–192. (Особистий внесок дисертанта: проведення хроматографічного поділу пептидних екстрактів, отриманих з поверхні пухлинних клітин, проведення імуноферментного аналізу, статистична обробка отриманих даних).

3. Противоопухолевая активность гликопротеидов Bacillus subtilis AB-56, Staphylococcus aureus и противоопухолевых вакцин, приготовленных на их основе / Г. П. Потебня, Г. В. Диденко, С. Л. Рыбалко, С. В. Хуторной // Укр. хіміотерапевтичний журнал. – 2002. – № 1. – С. 44–47. (Особистий внесок дисертанта: планування схеми експерименту, виділення цитотоксичного компоненту з ФКР В. subtilis АВ-56, конструювання вакцин з його використанням; порівняння протипухлинних ефектів, викликаних застосуванням вакцин (сконструйованих з використанням ЦТ-компонентів, отриманих від різних мікроорганізмів) у тварин з пухлиною; статистичний аналіз результатів експерименту).

4. Potebnya G. P. Evaluation of effectiveness of antitumor vaccines obtained with the use of metabolic products of Bacillus subtilis AB-56 / G. P. Potebnya, S. V. Khutornoy, G. V. Didenko // Exp. Oncol. – 2002. – Vol. 24, № 3. – P. 225–228. (Особистий внесок дисертанта: виділення цитотоксичного компоненту з ФКР В. subtilis АВ-56, конструювання вакцин з його використанням, дослідження протипухлинних ефектів, викликаних даною вакциною, у тварин з пухлиною; статистичний аналіз результатів експерименту).

5. The modifiсation of cancer vaccine prepared on the base of metabolic products of B. subtilis 7025 with the use of sorbents and automacrophages / G. V. Didenko, O. S. Dvorshchenko, G. S. Lisovenko, N. G. Kovalenko, G. V. Potebnya, V. V. Kikot, V. K. Pozur, A. A. Golub // Exp. Oncol. – 2003. –Vol. 25., N. 2. – P. 116–118. (Особистий внесок дисертанта: конструювання комплексних вакцин, з використанням наносорбентів в якості носія для вакцин, планування експерименту, виконання всіх його частин (дослідження протипухлинних ефектів, викликаних застосуванням комплексних вакцин), статистичний аналіз результатів експерименту).

6. Протипухлинна активність вакцин, виготовлених на основі ембріональних тканин та бактеріального глікопротеїду / Г. П. Потебня, Г. В. Діденко, О. С. Дворщенко, Г. С. Лісовенко, М. Г. Потебня, І. А. Вотякова, С. В. Василовська // Доповіді НАН України. – 2006. – № 4. – С. 172–177. (Особистий внесок дисертанта: планування експерименту, дослідження впливу вакцин на основі компоненту B. subtilis 7025 на показники імунної системи, статистичний аналіз результатів експерименту).

7. Протипухлинні властивості позаклітинної фруктозо-1,6-біфосфатази Bacillus subtilis 668 і препарату, виділеного з культуральної рідини Bacillus subtilis В-7025 / Г. В. Діденко, О. С. Дворщенко, О. В. Ястребова, М. Г. Потебня, Л. П. Панченко, І. Г. Скрипаль // Мікробіологічний журнал. – 2007. – Т. 69, № 3. –
   С. 68–73. (Особистий внесок дисертанта: дослідження цитотоксичних властивостей фруктозо-1,6-біфосфатази, отриманої від B. subtilis 668, та порівняння її дії з ефектом цитотоксичних сполук, отриманих від B. subtilis В-7025, планування та проведення всіх експериментальних досліджень, статистичний аналіз результатів експерименту).

8. Влияние специфической иммунотерапии на показатели иммунного статуса у больных колоректальным раком / Г. П. Потебня, В. А. Семерников, Е. А. Колесник, В. А. Кикоть, Г. С. Лисовенко, С. В. Хуторной, Г. В. Диденко // Онкология 2000:
   II съезд онкологов стран СНГ., 23–26 мая 2000 г. : тезисы докл. – Эксп. онкология. – 2000. – Т. 22, suppl. – № 754.

9. Діденко Г. В. Конструювання протипухлинних вакцин за допомогою компонентів синтезу Вас. subtilis AB-56 / Г. В. Діденко // Сучасні проблеми експериментальної та клінічної онкології: IV Республіканська наук.-прак. конф. молодих онкологів України, 21–23 бер. 2001 р. : тезиси докл. – К., 2001. – С. 4.

10. Протипухлинна дія ембріональних вакцин, виготовлених на основі продуктів метаболізму B. subtilis 7025 / Г. В. Діденко, О. С. Дворщенко, О. П. Карпенко, М. Г. Потебня // Современные проблемы экспериментальной и клинической онкологи : VІІ междунар. конф. молодых онкологов, 2–3 фев. 2006 г.: тезисы докл. – К., 2006. – С. 29.

11. Дворщенко О. С. Модифікація протипухлинної аутовакцини, виготовленої на основі глікопротеїду B. subtilis В-7025 за допомогою нанокомпозитів аеросилу/ О. С. Дворщенко, Г. В. Діденко, Г. П. Потебня / матеріали ХІ з’їзду онкологів України, 29 трав. – 02 черв. 2006 р.: – Судак, 2006. – С. 25.

12. Противоопухолевая активность аутовакцины на основе гликопротеида B. subtilis B-7025 после модификации нанокомпозитами аеросила / О. С. Дворщенко, Г. В. Диденко, Г. П. Потебня, О. А. Голуб // материалы IV сьезда онкологов и радиологов СНГ, 28 сент. – 01 окт. 2006 г. – Баку, 2006. – С. 40.

13. Ястребова Е. В. Цитотоксическая активность внеклеточных фруктозо-1,6-бифосфатазы Bacillus subtilis 668 и гликопротеида Bacillus subtilis B-7025 / Е. В. Ястребова, Г. В. Диденко, О. С. Дворщенко // IV International conference of young researchers, 10 nov. 2006 у. scientific abstr. – Kishinev, 2006. – P. 58.

14. Діденко Г. В. Вивчення механізмів дії продуктів метаболізму мікроорганізму B. subtilis B-7025, на пухлинні клітини і можливість створення на їх основі протипухлинних аутовакцин / Г. В. Діденко, О. С. Дворщенко // Современные проблемы экспериментальной и клинической онкологии: VІІІ конф. молодых онкологов с междунар. участием, 26–27 апр. 2007 г. : тезисы докл. – К., 2007. – С. 22.