Анотація до роботи:

Загородня С.Д. Розробка специфічних компонентів імуноферментної тест-системи для визначення антитіл до вірусу Епштейна-Барр. - Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.06. - вірусологія. - Інститут мікробіології і вірусології ім. Д.К.Заболотного НАН України, Київ, 2003.

Дисертація присвячена розробці імуноферментної тест-системи для виявлення антитіл до вірусу Епштейна-Барр. Одержаний антиген для сенсибілізації планшет, який містить кілька білків (EBNA, EA, VCA) вірусу Епштейна-Барр та підтверджена його специфічність. Оптимізовані умови проведення всіх етапів імуноферментного аналізу, склад детектуючих компонентів та буферних розчинів. До специфічного антигену та очищеного вірусу одержані гіперімунні поліклональні сироватки кроля та охарактеризована їх активність. Створені панелі позитивних та негативних сироваток, що гарантовано містять або не містять антитіла до ВЕБ відповідно, які надалі використовувались як стандарти при конструюванні тест-системи та визначенні критеріїв оцінки результатів.

Показано, що специфічність тест-системи “ІФА-АтВЕБ-стрип” становить 100%, а чутливість – 96%.

З використанням тест-системи та конкурентного ІФА досліджений рівень антигенної спорідненості ВЕБ з деякими представниками родини герпесвірусів як один з критеріїв її специфічності. Цей показник досить низький і становить 2,4%, 4,1% та 2,2% відповідно для ВЕБ та вірусу герпесу звичайного 1-го типу, ВЕБ та цитомегаловірусу, ВЕБ та вірусу оперізуючого лишаю.

Були досліджені понад 2000 сироваток різних груп населення м. Києва, (донорів, здорових вагітних жінок, хворих на інфекційний мононуклеоз, лімфоми, туберкульоз) та 45 виробничих серій “Імуноглобуліну людини нормального”. В них визначені високі рівні антитіл до ВЕБ, що свідчить про значну напруженість специфічного імунітету та широку циркуляцію цього вірусу

В результаті проведених досліджень вперше в Україні розроблена твердофазна імуноферментна тест-систему, яка дозволяє виявляти антитіла (IgG та IgM) проти вірусу Епштейна-Барр в сироватках крові людини та проводити диференційну діагностику захворювань, спричинених ВЕБ.

1. Створена перша вітчизняна тест-система «ІФА-АтВЕБ-стрип» для виявлення антитіл (IgG та IgM) до ВЕБ, в якій використаний отриманий за авторською методикою антиген з лізату лімфобластоїдних клітин В95-8 і показана наявність в ньому кількох вірусних білків.

2. Розроблені оптимальні умови проведення всіх етапів імуноферментної реакції з використанням цього антигену.

3. Створені панелі позитивних та негативних сироваток, які гарантовано містять або не містять антитіла до вірусу Епштейна-Барр.

4. Визначені основні параметри створеної тест-системи: специфічність складає 100 %, чутливість - 96 % та розроблені критерії оцінки одержаних результатів.

5. Вивчені рівні антигенної спорідненості вірусу Епштейна-Барр з вірусом герпесу звичайного 1-го типу, цитомегаловірусом, вірусом оперізуючого лишаю, які становили відповідно 2,4 %, 4,1 % та 2,2 %.

6. З використанням розробленої тест-системи “ІФА-АтВЕБ-стрип” було досліджено понад 2 000 сироваток, з них: хворих на інфекційний мононуклеоз 928; хворих на туберкульоз 176; хворих на лімфопроліферативні захворювання 20; здорового населення (донори, здорові вагітні жінки) 912, також досліджені 45 серій “Імуноглобуліну людини нормального” виробництва ДКПВБП “Біофарма”.

7. Визначені високі рівні антитіл до ВЕБ в сироватках обстежених груп населення, що свідчить про досить значну циркуляцію цього вірусу. Показана можливість використання тест-системи “ІФА-АтВЕБ-стрип” для діагностики захворювань, спричинених вірусом Епштейна-Барр.

8. Розроблена аналітично-нормативна документація на тест-систему “ІФА-АтВЕБ-стрип”, а саме проекти “Інструкції по виготовленню та контролю імуноферментної тест-системи ”ІФА-АтВЕБ-стрип””, проект “Інструкції по використанню іммуноферментної тест-системи “ІФА-АтВЕБ-стрип””, проект Тимчасомвої Фармакопейної статті на панелі позитивних та негативних сироваток до вірусу Епштейна-Барр.

Основний зміст роботи викладено у публікаціях:

1. Загородня С.Д., Нестерова Н.В., Дяченко Н.С., Баранова Г.В., Рибалко С.Л., Іванська Н.В., Василенко Л.Г. Конструювання імуноферментної тест-системи для виявлення антитіл проти вірусу Епштейна- Барр // Мікробіол. Журн. – 2001. - N6. – C.61-70.

2. Загородня С.Д., Нестерова Н.В., Баранова Г.В., Рыбалко С.Л., Василенко Л.Г., Руденко А.А. Обнаружение антител к вирусу Эпштейна-Барр в сыворотках крови доноров и больных инфекционным мононуклеозом // Бюлетень Інституту сільськогосподарської мікробіології УААН. – Чернігів, 2000. - N7.- C.53.

3. Н.С. Дяченко, К.В.Курищук, Л.С.Рядская, Н.И.Нетреба, С.П.Писарева, Э.Г.Михайлова, Н.В.Нестерова, С.Д. Загородняя, Н.Я.Спивак, В.П.Лозицкий, В.В.Смирнов. Специфические иммуноглобулины как эффективные препараты для лечения вирусных инфекций: современное состояние и насущные задачи. // Мікробіол. Журн. – 2002. – 63,N1. – с.3-10.

4. Загородня С.Д., Нестерова Н.В., Баранова Г.В. Дослідження антигенної спорідненості вірусу Епштейна-Барр з іншими герпес вірусами. // Вісник Біологія. Вип. 35, Київський Національний Університет ім. Тараса Шевченка.-2001.- С.40-43.

5. Загородня С.Д., Дяченко Н.С., Рыбалко С.Л., Повница О.Ю., Руденко А.А., Василенко Л.Г. Некоторые подходы к созданию иммуноферментной тест-системы для обнаружения антител против вируса Эпштейна-Барр // ІІ Науково- практична конференція „Бiоресурси та віруси». - К., 1998. - С.60.

6. S. Zagorodnya, N. Nesterova, N. Dyachenko, S. Rybalko Revealing of Epstein-Barr virus (EBV) antibodies in sera of healthy population // “Матеріали II з’їзду онкологів країн СНД”. – К., 2000. - c.195.

7. S. Zagorodnya N. Nesterova, N. Dyachenko, A. Kollos Revealing of antibodies to Epstein-Barr virus (EBV) in sera of patients with infectious mononucleosis, tuberculosis and HIV infection. // 11^th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases. Istanbul (Turkey), 1-5 маy, 2001. – Istanbul, 2001. - P.764.

8. Загородня С.Д., Нестерова Н.В., Баранова Г.В. Исследование антигенного родства вируса Эпштейна-Барр с другими герпесвирусами // ІІІ Науково- практична конференцiя „Бiоресурси та віруси” - К., 2001. - С.50.

9. Загородня С.Д., Дяченко Н.С., Нестерова Н.В., Баранова Г.В., Рибалко С.Л., Василенко Л.Г. С.Д. Загородняя, Н.С Технология получения специфического антигена для иммуноферментной тест-системы на антитела к вирусу Эпштейна-Барр и критерии её качества. // Международная научно-практическая конференция “Новые технологии получения и применения биологически активных веществ” (Алушта, 20-25 мая 2002.). – Алушта. - 2002- с.118.

10. Пат. UA№40966А. Тест-система на виявлення антитіл проти вірусу Епштейна-Барр “ІФА-АтВЕБ-стрип”. // Загородня С.Д., Дяченко Н.С., Нестерова Н.В., Баранова Г.В., Рибалко С.Л., Василенко Л.Г., Іванська Н.В. Бюлет. №7. – 15.08.2001.