Анотація до роботи:

Новіцька О.В. Розробка тест-системи на основі імуноферментного аналізу для визначення антитіл проти вірусу сказу у сироватці крові тварин.

–Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наук за спеціальністю 16.00.03 – ветеринарна мікробіологія та вірусологія. Національний аграрний університет, Київ, 2004.

У дисертації викладені результати розробки непрямого варіанта імуноферментного методу виявлення антирабічних антитіл у сироватці крові різних тварин.

Як твердий носій були використані полістиролові планшети фірми “VEB MLW” Німеччина, сорбовані очищеним і концентрованим антигеном вірусу сказу, штам “Щелково-51 К”, у концентрації 10 мкг/см³. Адсорбція проходила при +4 ^оС–16 год. Тривалість інкубації сироваток із сорбованим антигеном становила 60 хв при + 37 ^оС. Робоче розведення кон’югату на основі білка А Staphyloccocus aureus, поміченого пероксидазою хрону, становило 1:2000 на розчині 5 %-го сухого молока.

Результати титрування, отримані в ІФА, порівнювали з результатами отриманими в реакції нейтралізації. Крім виявлення антирабічних антитіл і визначення їх титру, також визначали активність зразків сироваток у МО за допомогою стандартної сироватки.

1. У дисертації теоретично та експериментально обґрунтовано розробку специфічної та чутливої тест-системи на основі непрямого варіанта імуноферментного аналізу для визначення антитіл проти вірусу сказу у сироватках крові тварин, яка дозволяє визначати рівень гуморального імунітету у тварин та здійснювати, у комплексі з іншими заходами, контроль рабічної інфекції.

2. Розроблено методику концентрування та очищення рабічного антигену (штам "Щелково-51 К") на основі застосування поліетиленіміну, що дозволило отримати імуносорбент - компонент тест-ситеми для виявлення антирабічних антитіл.

3. Підібрано клітинну культуру ВНК-21/17 та визначено умови культивування, які забезпечують урожайність штаму “Щелково-51 К” вірусу сказу у титрі не нижче 5,8 – 6,0 lg ЛД₅₀/0,03 см³; інфекційний титр вірусу в процесі пасажування поступово зростав (до 3-го пасажу) і до 5-го пасажу був на рівні 5,8 – 6,5 lg ЛД₅₀/см³.

4. Розроблено методику отримання високоактивних і специфічних антирабічних сироваток на кролях. П’ятикратне введення антирабічної вакцини КоКАВ (на 1-, 3-, 7-, 14- та 30-у добу) з ад’ювантом ISA-25 (на 1- та 14-у добу) забезпечує синтез антитіл проти вірусу сказу на рівні 10,39±0,7 lоg₂ ЕД_50.(210 МО/см³).

5. Встановлено високу імуностимулюючу активність та мінімальну реактогенність для кролів ад’юванту ISA-25. Застосування ад’юванту у дозі 25 % від об’єму введеного рабічного білка сприяє підвищенню титру антитіл проти вірусу сказу у сироватках крові кролів на 2–3 log₂; ад’ювант не впливає на фізіологічні, гематологічні та біохімічні показники у гіперімунізованих тварин, не викликає будь-яких помітних реакцій та утворень у місці його введення.

6. Відпрацьовано параметри постановки непрямого варіанта твердофазного ІФА в процесі виявлення антитіл проти вірусу сказу у сироватках крові тварин. Як імуносорбент найбільш оптимальним виявився концентрований рабічний антиген (концентрація специфічного білка становить 10 мкг/см³), отриманий з матеріалів клітинної культури ВНК 21/17, інфікованої штамом “Щелково-51 К” вірусу сказу; найбільш повна адсорбція антигену на полістиролових планшетах відбувається при +4 ^оС протягом 16 год; оптимальний термін інкубації сироваток з сорбованим рабічним антигеном становить 60 хв при + 37 ^оС; найбільш чіткі результати постановки непрямого варіанта ІФА в процесі виявлення антитіл проти вірусу сказу тварин мають місце при використанні поміченого пероксидазою хрону кон’югату на основі білку А Staphyloccocus aureus у робочому розведенні 1:2000.

7. Розроблена тест-система на основі імуноферментного аналізу для визначення антитіл проти вірусу сказу у сироватках крові тварин, яка за специфічністю не поступається реакції нетралізації на білих мишах, а за чутливістю значно перевищує її (до 260 раз); розроблена НТД на виготовлення та настанова із застосування тест-системи діагностичної імуноферментної “ІФА-RABIES AB” для виявлення антитіл проти вірусу сказу у сироватці крові тварин.

Публікації автора:

1. Новіцька О.В., Івасюнько Н.П. Удосконалення культивування постійної клітинної культури невриноми Гассерова вузла щура (НГУК-1)// Науковий вісник Національного аграрного університету. –2000. –Вип. 28. – С. 71–74 (Здобувач визначила вплив температури та різних поживних середовищ на клітинну культуру).

2. Скибіцький В.Г., Новіцька О.В., Антонова Л.О. Оптимізація отримання антирабічної сироватки на кролях з застосуванням ад'юванту // Науковий вісник Національного аграрного університету. –2001. –Вип. 42. – С. 168–172. (Здобувач брала участь в організації та проведенні досліду, здійснила клінічні, гематологічні та біохімічні дослідження, аналіз результатів та сформулювала висновки).

3. Скибіцький В.Г., Новіцька О.В., Антонова Л.О. Вплив різних схем уведення рабічного антигену на рівень віруснейтралізуючих антирабічних антитіл // Науковий вісник Львівської державної академії ветеринарної медицини

ім. С.З. Гжицького. Львів, –2001. –Т. 3. – С. 140–143. (Здобувач брала участь в організації та проведенні досліду, здійснила клінічні, гематологічні та біохімічні дослідження, аналіз результатів та сформулювала висновки).

4. Новіцька О.В. Виявлення антирабічних антитіл за допомогою імуноферментного аналізу // Збірник Луганського Національного аграрного університету. – 2004. –Вип. №33/45. Серія ветеринарні науки. –С. 55–59.

5. Новіцька О.В., Чумак Р.М. Аналіз сироваток крові тварин, імунізованих рабічними вакцинами за допомогою імуноферментного аналізу // Ветеринарна медицина: Міжвідомчий науково-тематичний збірник ІЕКВМ. –2004. –Вип. 83. – С. 164-167 (Здобувач брала участь в організації та проведенні досліду).

6. Патент на винахід Україна, МКІ 7 G 01N 33/00, 64544 А / Імуноферментний діагностикум для визначення специфічних антитіл проти вірусу сказу.

Скибіцький В.Г., Чумак Р.М., Новіцька О.В., Мартиненко Д.Л.; Національний аграрний університет. Заявл 24.06.2003; Опубл.16.02.2004. Бюл. № 2.

7. Сказ – актуальна проблема ветеринарної медицини.

Скибіцький В.Г., Ташута С.Г., Новіцька О.В., Івасюнько Н.П. //Тези доповідей наукової конференції професорсько-викладацького складу, наукових співробітників та аспірантів присвяченої 80-річчю факультету ветеринарної медицини.– К.: Наук. світ, –2000. – С.22.

8. Новіцька О.В. Результати гіперімунізації тварин з метою отримання антирабічної сироватки // Тези доповідей наукової конференції професорсько-викладацького складу, наукових співробітників та аспірантів за підсумками науково-дослідних робіт 2000 року. – К.: Наук. світ, 2001. – С.34.

8. Отримання діагностичної антирабічної сироватки на кролях. Скибіцький В.Г.,

Новіцька О.В., Ташута С.Г. // Праці Міжнародної науково-практичної конференції “Проблеми інфекційної патології тварин”, присвяченої пам’яті А.І. Собка (10–14 вересня 2001, Крим). Науковий вісник національного аграрного університету. –2001. –Вип. 36. – С. 239–241.

9. Оптимізація отримання антирабічної сироватки на кролях. Скибіцький В.Г.,

Новіцька О.В., Антонова Л.О., Ташута С.Г., Столюк В.В. // Тези доповідей: 3 Міжнародна науково - практична конференція “Біоресурси та віруси”, 11–15 вересня 2001, Київ. 2001. – С. 33.

10. Розробка іммуноферментного діагностикуму при сказі.

Новіцька О.В., Скибіцький В.Г., Чумак Р.М., Столюк В.В.// Тези доповідей першої конференції професорсько-викладацького складу, наукових співробітників та аспірантів навчально-наукового інституту ветеринарної медицини, якості і безпеки продукції АПК. –К.: Наук. світ, 2002. – С. 70–71.