Анотація до роботи:

Грушка Н.Г. Участь тромбоксану в загибелі гепатоцитів щурів в культурі.-Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидати біологічних наук за спеціальністю 03.00.13 – фізіологія людини і тварин. - Інститут фізіології ім. О.О.Богомольця НАН України, Київ, 2007р.

Дисертація присвячена вивченню участі метаболітів арахідонової кислоти за циклооксигеназним шляхом – Тх В_2, ПГЕ₂ та ПГF₂ в регуляції життєздатності та загибелі гепатоцитів щурів в культурі в нормі та за патологічних умов.

В роботі показано, що ТхВ₂ посилював загибель гепатоцитів за апоптотичним шляхом як в нормі, так і при дії ушкоджуючих речовин – чотирихлористого вуглеця та хенодезоксихолевої кислоти і суттєво не впливав на аутофагічні та некротичні процеси. Значно менший вплив на апоптотичну загибель гепатоцитів мали ПГЕ₂ та ПГF₂.

Дослідження впливу ТхВ₂ на розвиток апоптотичного процесу інтактих гепатоцитів показали, що цей ейкозаноїд підсилював апоптоз на початкових стадіях – конденсації хроматину в ядрі. Застосований на тлі дії хенодезоксихолевої кислоти, яка сама являється індуктором апоптозу, ТхВ₂ сприяв завершенню апоптозу. За умов дії сильного ушкоджуючого агента – чотирихлористого вуглеця, в гепатоцитах починалися процеси апоптозу, які здебільшого закінчувалися постапоптотичним некрозом. В цих умовах ТхВ₂ також посилював початкові апоптотичні перетворення, однак не призводив до посилення кінцевих стадій апоптозу. Блокатор циклооксигенази –ацетилсаліцилова кислота і блокатор тромбоксансинтази – бензілімідазол пригнічували апоптоз гепатоцитів в умовах дії чотирихлористого вуглецю і не мали впливу на апоптоз, індукований хенодезоксихолевою кислотою. Блокатор утворення мітохондріальних пор циклоспорин А пригнічував апоптоз, індукований ТхВ₂. Ці дані, а також підвищення активності каспази 3 при дії ТхВ₂ довели, що в механізм дії ТхВ₂ задіяний мітохондріальний шлях. Загалом результати дослідження свідчать про те, що продукт циклооксигеназного шляху метаболізму арахідонової кислоти ТхВ₂ відіграє регуляторну роль в підтримці клітинного гомеостазу в печінці за рахунок впливу на апоптоз за нормальних умов і впливає на нього при ушкодженні різної етіології.

Метаболіти арахідонової кислоти за циклооксигеназним шляхом – тромбоксани, які виділяються тромбоцитами при утворенні тромбів, клітинами Купфера та гепатоцитами (ТхА₂ і швидкоутворюваний з нього ТхВ₂), являються модуляторами функціонального стану печінки в нормі та при патології, однак їх безпосередній вплив на гепатоцити майже не з'ясований. Адекватною моделлю для вивчення впливу ейкозаноїдів, зокрема ТхВ₂, на гепатоцити і шляхи їх загибелі, є первинна культура.

1. Встановлено, що метаболіти арахідонової кислоти за циклооксигеназним шляхом (ТхВ₂, ПГЕ₂ та ПГF_2a) посилювали апоптотичну загибель гепатоцитів. Найбільш виражену дію мав екзогенний ТхВ₂, який підвищував кількість клітин з морфологічними ознаками апоптозу в інтактних культурах гепатоцитів, а також в клітинах, ушкоджених СС1₄ і ХДХК.

2. Екзогенний ТхВ₂ суттєво не впливав на аутофагічні та некротичні процеси у інтактних культурах гепатоцитів.

3. Екзогенний ТхВ₂ при дії на інтактні культури призводив до підвищення відсотка гепатоцитів з конденсованим хроматином, що є начальною стадією апоптозу. Однак за умов сумісної з ХДХК дії на гепатоцити ТхВ₂ значно підвищувалася кількість клітин з завершеним апоптозом, тобто сигнал від одного Тх був стимулятором початку апоптотичних перетворень в ядрі, а в комплексі з індуктором апоптозу ХДХК призводив до посилення апоптотичних процесів в цілому.

4. За умов дії СС1₄ в гепатоцитах не тільки починалися процеси апоптозу, але спостерігався вторинний (постапоптотичний) некроз. В умовах обробки гепатоцитів СС1₄, ТхВ₂ також посилював початкові апоптотичні перетворення в ядрі, однак не призводив до збільшення кількості клітин на кінцевих стадіях апоптозу.

5. Інгібітор циклооксигенази - ацетилсаліцилова кислота і інгібітор тромбоксансинтетази - бензилімідазол пригнічували апоптоз культивованих гепатоцитів щурів, спричинений СС1₄, і не впливали на апоптоз, індукований ХДХК.

6. Блокатор утворення мітохондріальних пор циклоспорин А пригнічував апоптоз, індукований ТхВ₂. Виявлено активацію каспази 3 в гепатоцитах, оброблених ТхВ₂, тобто механізм проапоптотичної дії ТхВ₂ реалізується через мітохондріальний шлях та активацію ефекторної каспази 3.

7. Встановлено проапоптотичний ефект ТхВ₂ у гепатоцитах в нормі та при впливі СС1₄ і ХДХК. Це свідчить про його важливу роль в видалені ушкоджених і старих клітин більш фізіологічним шляхом без розвитику

запального процесу, однак надмірна загибель клітин шляхом апоптозу може бути несприятливим фактором.

Публікації автора:

1. Хабатюк Н.Г. (Грушка Н.Г.), Корнійчук Г.М., Макогон Н.В., Алексєєва І.М. Участь простагландинів в модуляції різних шляхів загибелі гепатоцитів щурів in vivo // Клінична та експериментальна патологія. - 2004. - Т.З, №2, Ч.2.-С446-447.

2. Хабатюк Н.Г. (Грушка Н.Г.), Корнійчук Г.М., Розмаріца Н.О., Макогон Н.В., Алексєєва І.М. Морфологічні особливості загибелі культивованих гепатоцитів щурів за умов дії чотирихлористого вуглецю та хенодезоксихолевої кислоти // Наук. вісник Львівської національної академії ветеренарної медицини ім.С.З. Гжицького. -.2004.-Т.6, №1, ч.2 .-С.281-288.

3. Хабатюк Н.Г. (Грушка Н.Г.), Макогон Н.В., Корнійчук Г.М., Алексєєва І.М. Участь циклооксигеназного шляху метаболізму арахідонової кислоти в модуляції апоптозу культивованих гепатоцитів щурів. - "Збірник наукових праць співробітників КМАПО ім. Н.А. Шупика ", Київ, 2004.- С.236-240.

4. Н.Г. Грушка, Г.М. Корнійчук, Н.В. Макогон, І.М.Алексєєва Вплив екзогенного тромбоксану В₂ на загибель культивованих гепатоцитів щурів за різними шляхами та участь мітохондрій в цих процесах // Вісник наукових досліджень. – 2006.- №3.- С.31-33.

5. І.М. Алексєєва, Н.В. Макогон, Н.Г. Грушка, Г.М.Корнійчук. Модулююча роль ейкозаноїдів в програмованій загибелі гепатоцитів // Проблемы, достижения и перспективы развития медико-биологических наук и практического здравоохранения. Труды Крымского государственного медицинского университета им. С.И. Георгиевкого.– 2006.-Т.142, ч.3.- С.3-6.

6. Н.Г. Грушка, Г.М. Корнійчук, Н.В. Макогон, І.М.Алексєєва Морфологічні прояви апоптотичної загибелі культивованих гепатоцитів щурів при впливі тромбоксану В₂ в нормі та за умов дії гепатотропних речовин // Фізіол. журнал. - 2006. - №5. – С. 34-40.

7. Алексєєва І.М., Алексюк Л.І., Бризгіна Т.М., Корнійчук Г.М., Макогон Н.В., Мартинова Т.В., Павлович С.І., Сухіна В.С., Хабатюк Н.Г. (Грушка Н.Г.) Роль метаболітів арахідонової кислоти за циклооксигеназним і ліпоксигеназним шляхами в регуляції функціональної активності клітин печінки та імунокомпетентних клітин //Матеріали Пленуму наукового товариства патофізіологів України (Одеса, 19-21 вересня 2002 р.). Фізіологічний журнал. – 2002.-т 48, N4.- С.92.

8. Korniychuk A.N, Makogon N.V, Alexeyeva I.N. Khabatyuk N.G. (Grushka N.G.) The effects of eicosanoids and lipoxygenase inhibitors on necrosis and

apoptosis in rat cultured hepatocytes // Acta Physiologica Hungarica.-2002. -Vol.89, № 1-3.-P.21.

9. Хабатюк Н.Г. (Грушка Н.Г), Корнійчук Г.М., Макогон Н.В., Алексєєва І.М.Участь тромбоксану в апоптотичній загибелі гепатоцитів та куперівських клітин щурів в культурі // Тези конференції молодих учених Інституту фізіології ім.О.О.Богомольця НАНУ. - Фіз.журн. - 2004. -Т.50, № 3.- С.113.

10. Khabatyuk N.G. (Grushka N.G.), Korniychuk G.M., Rozmaritsa N.O., Makogon N.V..The effects of exogenous prostaglandins and thromboxane on apoptosis in cultured rat hepatocytes. // Theses and Poster presentation on Conference of students and young scientists on molecular biology and genetics, Institute of Molecular Biology and Genetics NAS of Ukraine, 25-27 September.- 2003, Kiev, Ukraine.-P.75.

11. Korniychuk A., Lushnikova I., Makogon N., Khabatyuk N. (Grushka N.) Influence of gadolinium chloride on cultured Kupffer cells // The 1^st All-Russian Conference in Physiology of Immune System (Sochi, Russia, 2003); International Journal on Immunorehabilitation.- 2003.- Vol.5, № 2.- P.144.

12. Korniychuk A., Khabatyuk N.(Grushka N), Makogon N., Alexeyeva I. The effects of exogenous prostaglandins and cyclooxygenase inhibitor on apoptosis in rat hepatocytes // Theses and Poster presentation on 3^rd FEPS Congress (Federation of European Physiologacal Societies), 28 June - 3 July, 2003.- Nice, France.-P.27.

13. Алексєєва І.М., Макогон Н.В., Корнійчук Г.М., Хабатюк Н.Г. (Грушка Н.Г.) Участь циклооксигеназного i ліпоксигеназного шляхів метаболізму арахідоновї кислоти в модуляції апоптозу культивованих гепатоцитів щурів.- В кн.: "Установчий з’їзд Українського товариства клітинної біології. Тези доповідей", Львів.- 2004.- С.343.

14. Н.Г. Грушка, А.Н. Корнийчук, Н.В. Макогон, И.Н. Алексеева Тромбоксан усиливает апоптоз гепатоцитов крыс в первичной культуре. -.Механизмы функционирования висцеравльных систем IV всероссийская конференция с международным участием, посвященная 80-летию Института физиологии им.И.П.Павлова РАН, Санкт-Петербург.- 2005.- С.77.

15. Н.Г. Грушка, Н.О. Розмаріца, Н.В. Макогон, І.М. Алексєєва Роль мітохондрій в розвитку апоптозу культивованих гепатоцитів щурів, спричиненого тромбоксаном В₂ // Проблемы, достижения и перспективы развития медико-биологических наук и практического здравоохранения. Труды Крымского государственного медицинского университета им. С.И. Георгиевкого. – 2006.-Т.142, ч.1.- С.130.

16. Н.Г. Грушка, А.Н. Корнійчук, Н.В. Макогон, І.Н. Алексєєва Участь тромбоксану в модуляції різних шляхів загибелі інтактних та ушкодженних гепатоцитів щурів in vitro // Зб. матер. ХVІІ з’їзду Українського фізіологічного товариства з міжнародною участю (м.Чернівці, 18-20 травня, 2006 р.) // Фізіол. журнал. - 2006. - Т.52, №2. - С.161.