Анотація до роботи:

Троцький П. А. Вплив надшвидкого заморожування ооцитів корів на їх подальший розвиток in vitro. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата сільськогосподарських наук за спеціальністю 03.00.20 – біотехнологія. – Інститут біології тварин УААН,
Львів, 2008.

Дисертаційна робота присвячена вивченню комплексного застосування методів отримання, цитоморфологічної оцінки, кріоконсервування, культивування і запліднення in vitro для отримання зародків великої рогатої худоби з деконсервованих ооцитів корів. Вивчено вплив різних концентрацій гліцерину і пропандіолу у вітрифікаційному розчині на життєздатність гамет при заморожуванні ооцит-кумулюсних комплексів корів. Встановлено, що залежно від стадії мейотичного дозрівання ооцитів, характеру оточуючих їх клітин кумулюса вони мають різну чутливість до низьких температур. Визначено ефективність різних способів виведення кріопротекторів за допомогою сахарози після розморожування гамет корів. Досліджено застосування різних культуральних систем для подальшого розвитку в умовах in vitro ембріонів великої рогатої худоби, отриманих з деконсервованих ооцитів. Проведено морфологічний і цитогенетичний аналіз незрілих і зрілих гамет корів, ранніх зародків великої рогатої худоби, отриманих з деконсервованих, дозрілих і запліднених in vitro яйцеклітин корів.

Розроблено та апробовано методи отримання, цитоморфологічної оцінки, кріоконсервування, культивування і запліднення in vitro ооцитів для отримання в умовах in vitro ембріонів великої рогатої худоби з деконсервованих гамет корів. Вивчено вплив різних кріопротекторів, пайєт, цитоморфологічних особливостей ооцитів на ефективність заморожування-розморожування і подальшого розвитку в умовах in vitro гамет корів.

1. Найперспективнішими для заморожування є ооцити корів з щільним багатошаровим кумулюсом. Частка таких клітин із загальної популяції ооцит-кумулюсних комплексів корів, придатних для культивування, становить 19,5 % (5,8±2,2 ОКК на яєчник), 55,3 % з них після деконсервування і дозрівання поза організмом досягає метафази-2 мейозу, кількість отриманих зародків після запліднення in vitro – 15,4 %.

2. Підвищення концентрації кріопротекторів (гліцерину і пропандіолу) з 50 до 70 % у загальному об’ємі вітрифікаційного розчину не призводить до збільшення після заморожування-розморожування і культивування кількості життєздатних та дозрілих до метафази-2 мейозу гамет корів, тоді як зниження їх концентрації (з 50 до 30 %) негативно впливає на життєздатність і подальший розвиток гамет in vitro.

3. Використання при кріоконсервуванні ооцит-кумулюсних комплексів корів пайєт діаметром 0,5 мм призводить до збільшення на 15,7 % кількості дозрілих поза організмом деконсервованих гамет до метафази-2 мейозу і на 10,9 % – зародків великої рогатої худоби після запліднення in vitro.

4. Багатоступеневий спосіб виведення кріопротекторів з гамет після їх деконсервування за допомогою розчину сахарози ефективніший, порівняно з варіантами одноступеневого способу (з використанням 1,0 М; 0,75 М; 0,5 М сахарози), за такими показниками, як життєздатність та дозрівання поза організмом ооцит-кумулюсних комплексів корів.

5. Чутливість ооцитів корів до низьких температур залежить від стадії їх мейотичного дозрівання. Використання для заморожування яйцеклітин корів на стадії метафази-2, мейозу порівняно з гаметами на стадіях диплотени та метафази-1, сприяє збільшенню на 3,3–8,0 % кількості дозрілих поза організмом гамет та на
6,2–11,7 % – кількості зародків великої рогатої худоби після запліднення in vitro деконсервованих яйцеклітин.

6. Попереднє культивування ооцит-кумулюсних комплексів корів перед заморожуванням за умов використання 10 і 20 клітин у 200 мкл культурального середовища є більш перспективним, ніж інші варіанти кількісного групування гамет, та сприяє збільшенню на 4,6–22,4 % їх життєздатності і дозрівання поза організмом до метафази-2 мейозу, після розморожування.

7. Моношари клітин гранульози або кумулюса ефективніші, ніж їх кондиційовані середовища, для подальшого розвитку в умовах in vitro зигот великої рогатої худоби, отриманих з деконсервованих ооцитів корів, оскільки вони сприяють збільшенню кількості зародків як в ранніх, так і доімплантаційних (морула та бластоциста) стадіях їх розвитку, відповідно на 10,4–12,5 % та 2,5–3,3 %.

Публікації автора:

1. Методологічні аспекти збереження генофонду сільськогосподарських тварин / [М. В. Зубець, В. П. Буркат, Ю. Ф. Мельник, І. В. Гузєв, М. Я. Єфіменко,
Б. Є. Подоба, Л. О. Бегма, О. Д. Бірюкова, І. С. Бородай, С. І. Ковтун, Ю. В. Мільченко, Н. П. Платонова, Ю. П. Полупан, М. Г. Порхун, Є. М. Рясенко, О. П. Чиркова,
П. І. Шаран, Є. Є. Заблудовський, П. А. Троцький, М. І. Сахацький, І. С. Вакуленко, В. І. Міхно, І. А. Помітун, В. Ф. Коваленко, Н. А. Мартиненко, П. В. Денисюк,
О. Г. Чирков, П. І. Польська, І. В. Лобачова, О. О. Катеринич, О. В. Терещенко,
В. В. Бех, С. В. Рекрут, О. М. Третяк, Л. І. Боднарчук, О. В. Галанова, Ю. В. Ляшенко]; наук. ред. І. В. Гузєв. — К. : Аграрна наука, 2007. — 120 с. (Дисертант брав участь в редагуванні і впорядкуванні, а також написанні розділу "Біотехнологічні методи як складові методології збереження генофонду тварин").

2. Троцький П. А. Заморожування ооцит-кумулюсних комплексів корів у пайєтах різного діаметра / П. А. Троцький // Вісник аграрної науки. — К., 2008. — № 5. — С. 80—82.

3. Оптимальний термін спільного інкубування гамет великої рогатої худоби при заплідненні in vitro / [В. А Яблонський., Е. А. Свідерська, О. Є. Гузеватий,
П. А. Троцький] // Тваринництво України. — 1998. — № 7. — С. 13. (Дисертантом проведено експериментальні дослідження, статистичну обробку отриманих даних).

4. Гузеватий О. Є. Оцінка розвитку деконсервованих ооцит-кумулюсних комплексів корів / О. Є. Гузеватий, П. А. Троцький // Вісник агроекологічної академії. — Житомир, 2000. — С. 140—141. (Дисертантом проведено експериментальні дослідження, проаналізовано отримані дані, підготовлено матеріали до друку).

5. Гузеватий О.Є. Кріоконсервування ооцитів корів з різним кумулюсом /
О. Є. Гузеватий, П. А. Троцький // Розведення і генетика тварин. — К., 2001. — Вип. 34. — С. 126—128. (Дисертантом проведено експериментальні дослідження, узагальнено результати, підготовлено матеріали до друку).

6. Троцький П. А. Життєздатність і дозрівання поза організмом деконсервованих ооцитів залежно від клітин кумулюсу, що їх оточують /
П. А. Троцький // Розведення і генетика тварин. — К., 2002. — Вип. 36. —
С. 185—186.

7. Троцький П. А. Дозрівання поза організмом деконсервованих ооцитів у групах з різною чисельністю гамет / П. А. Троцький // Науково-технічний бюлетень. — Харків, 2003. — Вип. 85. — С. 119—122.

8. Троцький П. А. Оцінка життєздатності і подальшого розвитку деконсервованих ооцитів корів з різним кумулюсом / П. А. Троцький // Вісник Сумського національного аграрного університету. — Суми, 2003. — Вип. 7. —
С. 246—251.

9. Троцький П. А. Порівняльний аналіз різних способів виведення кріопротекторів на життєздатність і дозрівання деконсервованих ооцит-кумулюсних комплексів корів / П. А. Троцький // Науково-технічний бюлетень. — Харків, 2005. — Вип. 91. — С. 113—116.

10. Троцький П. А. Порівняльний аналіз застосування різних концентрацій кріопротекторів у еквілібраційному розчині при кріоконсервуванні ооцит-кумулюсних комплексів корів / П. А. Троцький // Розведення і генетика тварин. — К., 2006. — Вип. 40. — С. 176—181.

11. Гузеватий О. Є. Заморожування ооцитів корів на різних стадіях мейотичного дозрівання та оцінка їх життєздатності після деконсервування /
О. Є. Гузеватий, П. А. Троцький // Науково-технічний бюлетень Інституту біології тварин і ДНДКІ ветпрепаратів та кормових добавок. — Львів, 2007. — Вип. 8. — № 1, 2. — С. 287—291. (Дисертантом проведено експериментальні дослідження, статистичну обробку отриманих результатів та їх аналіз).

12. Замораживание ооцитов млекопитающих в широком диапазоне скоростей теплообмена / [А. С. Салина, П. А. Троцкий, О. Е. Гузеватый, Л. В. Горбунов,
Е. Г. Лисина, Ю. М. Собко] // Проблемы криобиологии. — Харьков, 2005. — Т.15. — № 4. — С. 743—744. (Дисертантом проведено експериментальні дослідження, підготовлено матеріали до друку).

13. Троцький П. А. Порівняльний аналіз різних концентрацій вітрифікаційного розчину при заморожуванні ооцитів корів / П. А. Троцький,
О. Є. Гузеватий // Біотехнологічні, селекційні та організаційні методи відтворення, зберігання і використання генофонду тварин. — К., 1997. — С. 148—149. (Дисертантом проведено визначення оптимальних концентрацій кріопротекторів, узагальнено результати, підготовлено матеріали до друку).

14. Свидерская Э. А. Влияние времени совместного инкубирования сперматозоидов и яйцеклеток на получение эмбрионов крупного рогатого скота вне организма / Э. А. Свидерская, П. А. Троцкий, O. E. Гузеватый // Тезисы докладов региональной конференции молодых ученых и специалистов. — Оренбург, 1997. — Ч. 2. — С. 107—108. (Дисертантом проведено експериментальні дослідження, аналіз отриманих даних, підготовлено матеріали до друку).

15. Троцкий П. А. Влияние различных концентраций криопротекторов в витрифицирующем растворе при замораживании ооцитов коров / П. А. Троцкий, O. E. Гузеватый // Интенсификация производства продукции животноводства в Республике Беларусь. — Жодино, 1998. — С. 114. (Дисертантом розроблено схему експериментальних досліджень, проведено експериментальні дослідження узагальнено результати, підготовлено матеріали до друку).

16. Гузеватый O. E. Некоторые особенности криоконсервирования ооцит-кумулюсных комплексов коров / O. E. Гузеватый, П. А. Троцкий // Актуальные проблемы биологии в животноводстве : Третья междунар. конф. — Боровск, 2000. — С. 394—396. (Дисертант брав участь у підготовці і проведенні експериментів, оформленні матеріалів до друку).

17. Троцький П. А. Вплив різних способів виведення кріопротекторів на життєздатність і дозрівання ооцит-кумулюсних комплексів корів / П. А. Троцький // Молоді вчені – тваринництву : матер. міжнар. конф. мол. вчених – вихованців шкіл видатних академіків М. Ф. Іванова і Л. К. Гребеня. — К., 2000. — С. 92—93.

18. Троцький П. А. Застосування різних концентрацій етиленгліколю і гліцерину в еквілібраційному та вітрифікаційному розчинах при кріоконсервуванні ооцит-кумулюсних комплексів корів / П. А. Троцький // Конф. молодих вчених та аспірантів. — Чубинське, 2003. — С. 58—59.

19. Троцький П. А. Використання ендо- і екзоцелюлярних кріопротекторів для кріоконсервування ооцит-кумулюсних комплексів корів / П. А. Троцький // Матеріали конф. мол. вчених та аспірантів. — Чубинське, 2004. — С. 48—49.

20. Троцький П. А. Використання пайєт з різним діаметром для кріоконсервування ооцит-кумулюсних комплексів корів / П. А. Троцький // Конф. мол. вчених та аспірантів. — Чубинське, 2005. — С. 63—64.

21. Троцкий П. А. Использование сахарозы для выведения криопротекторов из деконсервированых ооцит-кумулюсных комплексов коров / П. А. Троцкий // Актуальные проблемы интенсификации производства продукции животноводства : тезисы докладов междунар. науч.-производственной конф. — Жодино
13–14 октября 2005. — Жодино, 2005. — С. 75.

22. Гузеватий О. Є. Методики оцінки якості ооцит-кумулюсних комплексів корів для кріоконсервування / О. Є. Гузеватий, П. А. Троцький, Ю. М. Собко // Методики наукових досліджень із селекції, генетики та біотехнології у тваринництві. — К., 2005. — С 180—187. (Дисертант брав участь в аналізі і узагальненні методів оцінки якості гамет корів та підготовці матеріалів до друку).

23. Троцкий П. А. Замораживание ооцит-кумулюсных комплексов коров в витрификационном растворе с различной концентрацией криопротекторов /
П. А. Троцкий // Актуальные проблемы биологии воспроизводства животных : зб. науч. трудов. — Дубровицы – Быково, 2007. — С. 122—124.