Анотація до роботи:

Дубровська А. М. Вивчення молекулярно-генетичних механізмів пухлинної прогресії при Ph'-позитивних лейкеміях та їх діагностика. - Рукопис.

Дисертація на здобутття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03. 00. 15 - генетика.-Інститут молекулярної біології і генетики НАН України, Київ, 2003.

Накопичення вторинних мутаційних змін гена bcr/abl під час прогресії ХМЛ було досліджено на рівні клітинної фізіології (аналізом характеру розподілу актинового цитоскелету у клітинах хворих на ХМЛ та ГЛЛ) та на рівні первинної структури Dbl-кодуючої ділянки гена bcr (аналізом мутацій методом ПДРФ, методом хімічного розщеплення ДНК-ДНК гетеродуплексів, секвенуванням dbl регіонів гена bcr/abl ). Порівняльний аналіз розподілу актину поліморфноядерних лейкоцитах різних донорів дозволив виділити 3 типи клітинного фарбування: 1) дифузійне – до нього відносилися клітини нормальних донорів; 2) кортикальне – характерне для більшості хворих – С. (ХМЛ, бластна криза), Ф. і Я. (ГЛЛ), а також для клітинних ліній К562 та U937; 3) цитоскелетний розподіл третього типу – dot-like – спостерігався лише в одному випадку К. (ХМЛ, бластна криза). Всі медичні діагнози “Ph’-позитивний ХМЛ” та “Ph’-позитивний ГЛЛ” було верифіковано нами методом ЗТ-ПЛР.

Аналіз мутацій дозволив у випадку хворого К. встановити трансверсії у Dbl - кодуючому регіоні гена bcr/abl в положенні 2127 ( заміна Т на С), та у положенні 2449 ( трансверсія С - А). Виявлені мутації можуть бути самодостатнім або додатковим фактором пухлинної прогресії.

З метою дослідження наявності та рівня експресії нормального білка Bcr нами було проекспресовано, очищено і використано для отримання поліклональних антитіл рекомбінантні Dbl та PH-гомологічні домени білка Bcr. Результати Вестерн-блот аналізу із використанням лізатів клітин хворих на ХМЛ дають змогу зробити припущення 1) про наявність негативного зворотнього зв'язку між ескпресією білків Bcr та Bcr/Abl 2) про існування механізмів регуляції експресії гена bcr/abl на рівні трансляції - у випадку наявності транскриптів та відсутності транслятів гена bcr/abl. Отже, отримані антитіла дають змогу детектувати нормальний білок Bcr і дозволяють розробити комплексний підхід для детекції філадельфійської перебудови . Це забезпечує більш глибокий аналіз молекулярних основ пухлинної етіології, проведення диференціальної діагностики для хворих з підозрою на ХМЛ і прогнозування подальшого перебігу захворювання.

1. Встановлено зв’язок між мутаційними змінами в Dbl-гомологічному домені білка Bcr/Abl та характером організації актинового цитоскелету.

2. Детектовано локуси нуклеотидних замін dbl-гомологічного району кДНК гена bcr/abl, виявлені зміни екстрапольовано на третинну структуру Dbl-гомологічного домена білка Bcr/Abl .

3. Розроблено схему клонування, експресії та очищення рекомбінантних DH та PH доменів гібридного онкобілка Bcr/Abl і отримані поліклональні антитіла проти них.

4. Оптимізовано умови детекції онкобілка Bcr/Abl і нормального білка Bcr у здорових та хворих донорів методом Вестерн-блот аналізу.

5. Виявлено існування негативного зворотнього зв’язку між рівнем експресії онкобілка Bcr/Abl і його нормального гомолога Bcr.

Публікації автора:

1. Телегеев Г. Д., Дубровская А. Н., Дыбков М. В. Роль Bcr/Abl в лейкемогенезе // Экспериментальная онкология. -1999. -T. 21, № 3-4. -C. 182-194.

2. Телегеев Г. Д., Дубровская А. Н., Дыбков М. В. Mутации в гибридном bcr/abl гене как возможный фактор опухолевой прогрессии при ХМЛ // Біополімери і клітина. -2000. -T. 16, №6. -C. 482-486.

3. Телегеев Г. Д., Дубровская А. Н., Дыбков М. В. Мачило В. М., Гартовская И. Р. Детекция Ph’-хромосомы при помощи полимеразной цепной реакции // Гематологія і трансфузіологія. -2000. -T 1, №1. -C. 37-40.

4. Телегеєв Г. Д., Дибков М. В., Дубровська А. М., Малюта С. С. Делеція п’ятого екзона гена bcr/abl при гострому лімфобластному лейкозі з філадельфійською хромосомою // Біополімери і клітина. - 2001. -T. 17, №4. -C. 298-301.

5. Телегеев Г. Д., Дубровская А. Н., Дыбков М. В. Ингибитор тирозинкиназ STI571 в терапии Ph’-лейкозов // Гематологія і трансфузіологія. -2001. -T. 3, №1. - C. 14-21.

6. Дубровская А. Н., Телегеев Г. Д., Дыбков М. В., Волошаненко О. С., Швед В. В., Малюта С. С. Мутационный анализ и бактериальная экспрессия Dbl-гомологичного домена химерного белка Bcr/Abl // Біополімери і клітина.-2002. -T.18, №2. - C. 96-101.

7. M.V.Dybkov, G.D.Telegeev, A.N.Dubrovskaya, S.S. Maliuta. Deletion in dbl domain of bcr/abl gene in leukemia patients with Ph' chromosome // Experimental Oncology. -2002. -Vol.24, №2.- P.153-154.

8. Телегеев Г. Д., Колийчук А. Н., Дыбков М. В., Третяк Н. М., Малюта С. С. Детекция филадельфийской хромосомы при помощи молекулярно-биологических методов // Материалы конференции «Состояние медицинской генетики на Украине».- Київ.-1999. -C. 138-139.

9. Телегеев Г. Д., Колийчук А. Н., Дыбков М. В., Третяк Н. М., Малюта С. С. ПЦР-диагностика множественной миеломы с использованием аллельспецифических праймеров //. Матеріали конференції «Состояние медицинской генетики на Украине».- Київ.-1999. -C. 139.

10. Telegeev G. D., Dybkov M. V., Dubrovskaya A. N., Maliuta S. S. A second mutation of bcr/abl oncogene as a possible factors of tumor progression // Abstr. second congress of oncologist of country of UIS.- Kyiv.-2000.-P. 207.

11. Dubrovskaya A. N. Dbl domain mutations of the Bcr/Abl oncoprotein as a prerequisite for CML tumor progression // Abst. Conference for students, PhD students and young scientists. -Kyiv. -2001.-P. 137.

12. Волошаненко О. С., Дубровская А. Н., Телегеев Г. Д., Малюта С. С. Бактериальная экспрессия РН домена онкобелка Bcr/Abl и получение поликлональных антител для его иммунохимической детекции // Материалы 6-й Пущинской школы-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века ».- T1.- Пущино (Российская Федерация).-2002.-C. 230.

13. Волкова И. А., Дубровская А. Н., Телегеев Г. Д., Дыбков М. В. Клонирование и бактериальная экспрессия Dbl-гомологичного домена слитого BCR/ABL белка // Материалы 6-й Пущинской школы-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века».- T1.-Пущино (Российская Федерация).-2002.-C. 227.

14. Telegeev G.D., Dybkov M.V., Dubrovska A.N., Maliuta S.S. Influence of Bcr/Abl fusion proteins on course of Ph' leukemias // Abstr. 4rd Parnas Conference Molecular mechanism of cell activation: biological signals and their target enzymes.-Wroclaw (Poland). -2002. -P.22.