Анотація до роботи:

Дегтярьов І. М. Вивчення протеїногенних властивостей M. bovis та удосконалення способу виготовлення туберкуліну очищеного (ППД) для ссавців. — Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наук за спеціальністю 16.00.03 — ветеринарна мікробіологія та вірусологія. Національний науковий центр «Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини». Харків, 2009.

У дисертаційній роботі проаналізовано епізоотичну ситуацію щодо захворювання ВРХ на туберкульоз у господарствах України та виділення культур мікобактерій з патологічного матеріалу.

У виділених культур M. bovis вивчено культурально-морфологічні, біохімічні та біологічні властивості. Шляхом селекції отримано штам M. bovis з високими протеїногенними властивостями, на який отримано реєстраційне свідоцтво № 425 та патент України на корисну модель № 25807. Розроблено спосіб висіву та адаптації протеїногенного штаму в біофабричних умовах, а також методику визначення повноти інактивації туберкуліну. Відпрацьовано технологічні параметри мембранного фракціонування білків культурального фільтрату, що дозволило збільшити вихід препарату та зменшити його собівартість.

Отримано туберкулін з дезінтегрованої бактеріальної маси та вивчено його властивості (стерильність, нешкідливість, активність і сенсибілізуючі властивості) у дослідах на лабораторних і сільськогосподарських тваринах.

Розроблено методику визначення біологічної активності національного стандарту туберкуліну очищеного (ППД) для ссавців у стандартному розчині, яка відповідає вимогам МЕБ.

Здійснено порівняльне випробування туберкулінів вітчизняного виробництва з туберкулінами NIBSCE (Великобританія) та «Десау» (Німеччина).

1. У дисертації наведено дані з вивчення епізоотичної ситуації щодо туберкульозу великої рогатої худоби в господарствах України та виділення культур мікобактерій з патологічного матеріалу. Ідентифіковано протеїногенний штам M. bovis № 4, придатний для виготовлення туберкуліну очищеного (ППД) для ссавців. Розроблено спосіб виробничого висіву матричної розплодки на синтетичне поживне середовище, отримано протеїн з бактеріальної маси M. bovis, удосконалено технологічну схему біофабричного виготовлення туберкуліну (ППД) для ссавців, методику визначення повноти інактивації та біологічної активності туберкуліну відповідно до міжнародного стандарту.

2. За 11-річний період (1996–2006 рр.) зареєстровано захворювання великої рогатої худоби на туберкульоз у 238 господарствах Київської, 123 — Черкаської, 108 — Сумської і 102 — Запорізької областей. Установлено також спорадичні випадки цього захворювання в господарствах Львівської, Полтавської, Одеської та Івано-Франківської областей. Із загальної кількості досліджених культур збудника туберкульозу ідентифіковано 29,8 % — M. bovis, 2,2 % — M. avium, 0,6 % — M. tuberculosis та 67,4 % — атипових мікобактерій.

3. Доведено, що епізоотичні культури мікобактерій M. bovis мають неоднакові протеїногенні властивості. Продукція білка за їх вирощування в синтетичному поживному середовищі коливається в межах від 1,7 до 4,8 мг/см³.

4. Культивування на синтетичному поживному середовищі штаму M. bovis № 4 протягом 60 діб забезпечує накопичення загального білка 4,8 ± 0,13 мг/см³, біологічна активність виготовленого туберкуліну становить 50 952 ТО/см³.

5. Розроблено спосіб адаптації, висіву та культивування 20–25-добової матричної розплодки виробничого штаму M. bovis на синтетичне поживне середовище, який дозволяє вдосконалити процес виробничого висіву, зменшити вибраковку виробничих висівів на 8–10 %, а також він є більш безпечним у протиепідемічному та протиепізоотичному відношеннях.

6. Виготовлений з дезінтегрованої бактеріальної маси M. bovis туберкулін є специфічним, активним, нереактогенним. За триразового (інтервал 5 діб) внутрішньошкірного введення він не викликає алергічних реакцій у здорових тварин.

7. Інтенсивність внутрішньошкірних реакцій у морських свинок в гетерологічній системі на введення туберкуліну з вмістом білкових фракцій 10 кДа не перевищують у сумі 125,5 мм, 100 кДа — 148,0 мм, 300 кДа — 158,0 мм, більше 300 кДа — 190 мм. Найбільш виражену специфічну активність має туберкулін, що містить фракції білків 10–300 кДа.

8. Удосконалено технологічну схему виготовлення туберкуліну очищеного (ППД) для ссавців у стандартному розчині, що дозволяє в біофабричних умовах виготовляти алерген, який за біологічною активністю не поступається національному та міжнародному стандартам. У дослідах на сприйнятливих тваринах реакції збігаються у 100 % випадків з туберкуліном NIBSCE (Великобританія).

9. Розроблено методику визначення біологічної активності туберкуліну, яка основана на напівлогарифмічній залежності інтенсивності прояву реакцій від введеної дози алергену та визначення величини відносного коефіцієнту, що дозволяє достовірно встановити активність туберкуліну, створити національний стандарт цього алергену та здійснювати контроль якості виробничих серій туберкуліну відповідно до вимог ЄФ і МЕБ.

Публікації автора:

1. Завгородній А. І. Оцінка ефективності експериментальних мікросерій туберкуліну для ссавців [Текст] / А. І. Завгородній, В. В. Білушко, І. М. Дегтярьов // Зб. наук. праць Полтавської держ. аграр. акад. — 2006. — С. 110–115. (Дисертант здійснив дослідження та взяв участь в узагальненні, обробці та оформленні отриманих результатів).

2. ППД-туберкулін для ссавців виробництва Сумської біофабрики [Текст] / А. І. Завгородній, П. М. Тихонов, В. В. Білушко, І. М. Дегтярьов, В. Г. Скрипник // Вет. медицина України. — 2006. — № 2. — С. 34–35. (Дисертант зібрав та узагальнив фактичний матеріал, підібрав та проаналізував літературні джерела).

3. Білушко В. В. Отримання очищених туберкулінів для алергічної діагностики туберкульозу тварин [Текст] / В. В. Білушко, І. М. Дегтярьов // Вісник Сумського нац. аграр. ун-ту. Серія «Вет. медицина» : наук.-метод. журн. — 2006. — Вип. 1–2 (15–16). — С. 19–22. (Дисертант підібрав і проаналізував літературу, виготовив туберкулін та вивчив його активність і специфічність).

4. Білушко В. В. Порівняльне вивчення властивостей туберкулінів для ссавців, виготовлених за різними технологіями [Текст] / В. В. Білушко, І. М. Дегтярьов // Пробл. зооінженерії та вет. медицини : зб. наук. праць Харківської держ. зооветеринарної акад. — Х., 2006. — Вип. 13, ч. 2: Матеріали міжнарод. наук. конф. «Актуальные вопросы борьбы с инфекционными заболеваниями в гуманной и ветеринарной медицине», посвящ. 160-летию со дня рождения лауреата Нобелевской премии И. И. Мечникова (27–30 нояб. 2005 г.). — С. 51–55. (Дисертант спланував досліди, виконав експериментальні дослідження та взяв участь у написанні статті).

5. Білушко В. В. Вдосконалення засобів алергічної діагностики туберкульозу у ссавців [Текст] / В. В. Білушко, І. М. Дегтярьов // Пробл. зооінженерії та вет. медицини : зб. наук. праць Харківської держ. зооветеринарної акад. — Х., 2006. — Вип. 13, ч. 2: Матеріали міжнарод. наук. конф. «Актуальные вопросы борьбы с инфекционными заболеваниями в гуманной и ветеринарной медицине», посвящ. 160-летию со дня рождения лауреата Нобелевской премии И. И. Мечникова (27–30 нояб. 2005 г.). — С. 119–122. (Дисертант здійснив дослідження та взяв участь в узагальненні й оформленні матеріалів).

6. Завгородній А. І. Діагностична ефективність туберкулінів, що виготовлені за різними технологіями [Текст] / А. І. Завгородній, В. В. Білушко, І. М. Дегтярьов // Зб. наук. праць Луганського нац. аграр. ун-ту. — Луганськ, 2006. — № 69 (92) . — С. 164–168. (Дисертант підібрав і проаналізував літературу, виготовив туберкулін для ссавців різними способами та здійснив порівняльне вивчення його біологічних властивостей).

7. Дегтярьов І. М. Випробування експериментального туберкуліну для ссавців [Текст] / І. М. Дегтярьов // Наук. вісник Львівської нац. акад. вет. медицини ім. С. З. Гжицького. — Львів, 2006. — Т. 8, № 3 (30), ч. 1. —
С. 27–30.

8. Завгородній А. І. Виготовлення туберкуліну для ссавців із дезінтегрованої бактеріальної маси мікобактерій [Текст] / А. І. Завгородній, В. В. Білушко, І. М. Дегтярьов // Зб. наук. праць Луганського нац. аграр. ун-ту. — Луганськ, 2007. — № 78/101. — С. 218–222. (Дисертант здійснив дослідження, узагальнив та оформив матеріали статті).

9. Пошук протеїногенних штамів мікобактерій M. bovis для виготовлення туберкуліну (ППД) для ссавців [Текст] / А. І. Завгородній, П. М. Тихонов, В. В. Білушко, І. М. Дегтярьов, С. А. Позмогова / Вет. медицина : міжвід. темат. наук. зб. — Х., 2008. — Вип. 89. — С. 184–189. (Дисертант особисто виконав експериментальну роботу з культивування мікобактерій M. bovis на поживних середовищах, підбір і аналіз літератури та написання статті).

10. Пат. на корисну модель № 25807 Україна МПК (2006) C12N 1/20. Туберкуліногенний штам Mycobacterium bovis № 4 [Текст] / Завгородній А. І., Стегній Б. Т., Білушко В. В., Позмогова С. А., Дегтярьов І. М., Удовенко Я. С. ; заявник та патентовласник Нац. наук. центр «Ін-т експерим. і клін. вет. медицини». — № u 2007 03311 ; заявл. 27.03.07 ; опубл. 27.08.07, Бюл. № 13. — 4 с. (Дисертант здійснив вивчення культуральних і протеїногенних властивостей 5 культур збудника туберкульозу M. bovis).