1. За допомогою застосування електрохімічного методу показана можливість розрізняння специфічних типів нейротрансміттерів по амплітуді та розташуванню окислювальних та відновлювальних піків струму на відповідних циклічних вольтамперограмах. Виявлено, що при дії суміші кожний з медіаторів окислюється або відновлюється на поверхні електроду незалежно від іншого. Визначено характеристики електродів з карбоновими волокнами та показана адекватність їх застосування в електрофізіологічних експериментах на рівні окремих клітин. На підставі цього запропоновано новий метод ідентифікації адреналіну та норадреналіну, що вивільняються хромафінними клітинами з використанням різних тестуючих постійних потенціалів при безпосередньому вимірюванні процесу вивільнення. 2. Використовуючи різні способи ініціації екзоцитозу в хромафінних клітинах: активації специфічних ацетилхолінових рецепторів та деполяризації клітини, зареєстровано дві окремих кінетичних стадії процесу вивільнення, характеристики яких залежать від типу стимуляції. Показано, що при короткотривалому збудженні, що може відбуватись при нормальній іннервації хромафінних клітин, загальна кількість вивільнених катехоламінів практично не залежить від способу ініціації процесу екзоцитозу. 3. Виявлено, що при довготривалій стимуляції, що може виникати під час важких патофізіологічних станах, постійний рівень вивільнення суттєво залежить від способу збудження клітини. При таких умовах активація ацетилхолінових рецепторів буде відігравати ключову роль в підтриманні процесу секреції в хромафінних клітинах ймовірно внаслідок активації механізмів, що опосередковуються специфічними вторинними посередниками. Однак при цьому не виявлено суттєвих відмінностей в ефективності ініціації екзоцитозу при стимуляції обох підтипів ацетилхолінових рецепторів: нікотинових та мускаринових. 4. Показано, що часова динаміка окремих квантових подій вивільнення залежить від способу стимуляції хромафінних клітин. У випадку активації ацетилхолінових рецепторів амперометричні піки мали достовірно меншу тривалість, часи наростання та спаду, проте більшу амплітуду, ніж у випадку деполяризації гіперкалієвим розчином. Не виявлено принципових відмінностей кінетики індивідуальних подій вивільнення при стимуляції різних типів ацетилхолінових рецепторів. 5. Сукупна стимуляція клітини агоністами ацетилхолінових рецепторів та деполяризуючого агенту призводить до появи секреторних подій, часова динаміка яких повільніша, ніж при стимуляції клітин лише агоністами, проте більш транзієнтна, ніж при активації потенціал-керованих Са2+-каналів. Постійність площі амперометричних піків при всіх типах стимуляції свідчить про те, що в процесі вивільнення в хромафінних клітинах виділяється однакова кількість нейротрансміттеру під час процесу вивільнення із окремих секреторних везікул. 6. Моделювання динаміки екзоцитозу окремої секреторної везікули вказує, що зміна кінетичних характеристик індивідуального піку може відбуватися внаслідок зміни радіусу фузійної пори, що утворюється при злитті везікули з плазматичною мембраною. 7. Припускається, рецептор-опосередковані процеси здатні взаємодіяти з специфічними протеїнами, які приймають участь на фінальних стадіях процесу злиття секреторної везікули з плазматичною мембраною ймовірно шляхом формування фузійної пори, можуть змінювати їх конформаційну будову, що в свою чергу може призводити до збільшення загального радіусу пори та прискорення кінетики процесу вивільнення медіатора. Перелік опублікованих праць здобувача за темою дисертації. 1. Починюк О.М. Заїка О.Л. Лук`янець О.О., Техніка порівняльних амперометричних вимірів для ідентифікації вивільнених нейротрансміттерів. Нейрофізіологія 1998, т.30, №4/5, ст.284-287. 2. Заика О.Л. Починюк О.Н. Лукьянец Е.А. Электрохимические исследования индуцируемой секреции катехоламинов из одиночных везикул хромаффинных клеток крысы. Український біохімічних журнал 2001, т.73, №4, ст. 69-72 3. Zaika O.L. Pochynyuk O.M. Lukyanetz E.A. Comparative studies of calcium transients induced by acetylcholine in rat chromaffin cells. Нейрофізіологія 2002, т.34, №2/3 ст. 270-272. Тези доповідей. 1. Заика О.Л. Починюк О.Н. Лукьянец Е.А. Электрохимические исследования индуцируемой секреции катехоламинов из одиночных везикул хромаффинной клетки крысы. Укр. Біохім. Журнал 2000 т.72, №6 ст. 125. 2. Починюк О.Н., Заика О.Л., Лукьянец Е.А. Амперометрическое исследование секреторных ответов хромаффинных клеток крысы, индуцируемых агонистами ацетилхолиновых рецепторов. Архив клинич. и экспер. медицины 2001, т.10, №2, ст. 206. 3. Zaika O.L., Pochynyuk O.M., Lukyanetz E.A. Altering of kinetics of neurotransmitter release measured by amperometry during types of stimulation in rat chromaffin cells. Sulejow 2001 p.23.
Анотації.
| 